使用基于注射器加压法提取质外体细菌

摘要

来源： Rufián, J. S., 等单细胞表达分析 Pseudomonas syringae 植物组织中的基因。 视频实验杂志 (2022)

本视频展示了一种基于注射器压力的方法，用于提取在植物细胞间质（即细胞间隙）中增殖并形成微菌落的质外体细菌。该方法可获得无碎片的细菌样品，适用于后续的单细胞分析。

方案

从植物胞间空间提取细菌

1. 接种后第四天，剪取地上部分 拟南芥 植物或接种过的菜豆叶片放入无针头的20 mL注射器中（图 2G）。对于豆类叶片，将叶片自身卷起，使远轴面朝外，如图所示 图2F.
2. 加入足量蒸馏水以浸没组织（通常为10–15 mL）。
3. 插入活塞，将注射器垂直放置，针头朝上，轻轻敲击注射器筒壁，使内部多余的空气和气泡逐渐移至针头附近。推动活塞排出空气。当注射器内空气尽可能减少后，用石蜡膜封住注射器筒的前端开口。
4. 小心按压柱塞以产生正压，直至组织颜色变深（图1I 和 图2H）。然后，拉动活塞以产生负压（图1J 和 图2I）。重复此步骤 3 至 5 次。
5. 移除石蜡膜和活塞，收集含有质外体提取细菌的液体，如 图2J。

结果

图1：利用细菌接种和质外体提取 拟南芥 植物 （A） 金属网正确安装后的花盆制备 （B） 使用牙签按所示方式播种种子 (C). (...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
20 mL 注射器			无特殊要求
50 mL 锥形管	Sarstedt
封口膜	Pechiney Plastic Packaging
镊子			无特殊要求
直径 25 cm 真空室	Kartell	554
真空泵	GAST	DOA-P504-BN