使用注射器压力法提取囊性细菌

摘要

来源： Rufián， J. S. 等，《植物组织中铜 扁桃杆菌注射 器基因表达的单细胞分析》。 J. Vis. Exp. （2022年）

本视频演示了一种基于注射器的压力方法，用于提取凋零细菌，这些细菌在细胞间隙（细胞间空间）中繁殖并形成微菌落。该方法产出无杂质的细菌样本，适合下游单细胞分析。

方案

从附生体中提取细菌

1. 接种后四天，将 拟南芥 的气生部分或豆类植株接种的叶片剪下，放入无针20毫升注射器中（见图2G）。对于豆叶，将叶片卷起，使背面向外，如 图2F所示。
2. 加入足够量的蒸馏水覆盖组织（通常为10-15毫升）。
3. 插入活塞，注射器竖直，针尖朝上，轻轻敲击枪管，清除注射器内多余的空气和气泡，直到所有空气集中在注射器尖端附近。滑动活塞把空气排出。当注射器内空气尽可能减少后，用石蜡膜覆盖注射器管的尖端。
4. 小心按压活塞以产生正压，直到组织变暗（图1I和图2H）。然后，拉动活塞以产生负压（见图1J和图2I）。重复这个步骤3-5次。
5. 取下石蜡膜和活塞，收集含有凋亡体提取细菌的液体 ，如图2J所示。

结果

图1：利用拟南芥进行细菌接种和细胞膜剥离。（A） 准备盆栽，金属网已正确固定。（B）按照（C）所示，用牙签撒种。（D）拟南芥植株准备接种。（E）两根木棍便于将植物浸入细菌溶液中，而不会到达花盆或土壤（

材料