在液体培养基中获得纯细菌培养物

摘要

来源： Brumfield, K. D. 等 用于维持和区分生物型的实验室技术 霍乱弧菌 临床与环境分离株 视频实验杂志 (2017)

本视频展示了细菌在液体培养基中的培养过程。振荡可促进通气并使营养物质均匀分布，支持细菌的指数生长，从而获得均匀且具有代谢活性的菌液，适用于后续实验操作。

方案

1. 培养与生长的维持 霍乱弧菌 菌株

1. 冻存菌种的制备与使用
   1. 取1.8 mL液体过夜培养物，于无菌的2 mL微量离心管中，以≥8,600 × g离心2分钟，弃上清液，用移液器将菌体沉淀重悬于900 µL新鲜的LB（Luria-Bertani）液体培养基中。
   2. 向培养物中加入900 µL无菌的60%（v/v）甘油，涡旋混匀。
   3. 将混合液转移至无菌的2 mL冻存管中，于-80 °C长期保存。
   4. 使用时，用无菌接种环取少量冻存菌液，在LB琼脂平板上划线分离单菌落。使用后立即放回冻存管至-80 °C，防止菌液完全融化。将平板倒置，于37 °C培养12至16小时。
2. 液体培养基中过夜培养物的培养
   1. 从冻存菌种中（按第1.1.4节方法）在LB琼脂平板上划线分离单菌落。将平板倒置，于37 °C培养12至16小时。
   2. 用无菌接种棒接触单菌落表面，将单个菌落转移至含4 mL液体LB培养基的无菌10 mL培养管中，接种培养。
   3. 于37 °C、225转/分钟（rpm）振荡培养箱中振荡培养12至16小时。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
60% 甘油	Calbiochem	356352	http://www.emdmillipore.com/US/en/product/甘油，分子生物学级—CAS 56-81-5—Calbiochem,EMD_BIO-356352
琼脂	Becto, Dickinson and Co.	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&父类别名称=&categoryId=&类别名称=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
HCl	Fisher Scientific	A144-212	腐蚀性；https://www.fishersci.com/shop/products/hydrochloric-acid-certified-acs-plus-fisher-chemical-10/a144212?searchHijack=true&A144212&searchType=快速搜索
Le loop	Decon Labs Inc.	MP190-25	http://deconlabs.com/products/leloop/
Le stab	Decon Labs Inc.	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
NaCl	Fisher Scientific	S271-10	https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/s27110?searchHijack=true&S27110&searchType=快速搜索
培养皿（100 mm × 15 mm）	Fisher Scientific	FB0875712	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875712#?keyword=FB0875712
胰蛋白胨	Becto, Dickinson and Co.	211705	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211705&父类别=&父类别名称=&categoryId=&类别名称=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211705%26typeOfSearch%3DproductSearch
酵母提取物	Becto, Dickinson and Co.	212750	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=212750&父类别=&父类别名称=&categoryId=&类别名称=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D212750%26typeOfSearch%3DproductSearch