使用氯化三苯基四氮唑比较 Vibrio cholerae 菌株的运动性实验

摘要

来源： Brumfield, K. D., 等用于维持和区分生物型的实验室技术 霍乱弧菌 临床与环境分离株 视频实验杂志 (2017)

本视频演示了一种使用氯化三苯基四氮唑的软琼脂实验，通过观察活跃迁移细胞周围红色区域的形成来可视化代谢活性，从而评估和比较霍乱弧菌（Vibrio cholerae）菌株的运动能力。

方案

1. 运动性检测
   1. 在液体LB（Luria-Bertani）培养基中培养Vibrio cholerae菌株过夜。
   2. 取1.8 mL过夜培养物，在无菌的2 mL微量离心管中以≥8,600 × g离心2分钟，收集菌体，并用移液器弃去上清液。用移液器将菌体沉淀重悬于1.8 mL 1× PBS（磷酸盐缓冲液）中。
   3. 重复洗涤步骤三次，最后将菌体重悬于1.8 mL 1× PBS中。
   4. 用接种针插入洗涤后的液体培养物中，然后垂直穿刺接种至运动性琼脂平板中。每次接种之间，需使用本生灯对接种针进行灭菌；穿刺琼脂时应确保接种针不弯曲，以免影响实验结果。
   5. 将平板倒置（盖子朝上）于37 °C孵育14至24小时。孵育14小时后，应密切观察运动性平板，防止菌落过度生长。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂	贝克顿·迪金森公司	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&父类别=&父类别名称=&categoryId=&类别名称=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
台式离心机	Eppendorf	5424	适用于1.5 ml离心管的任何离心机
勒氏穿刺法	Decon Labs Inc.	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
LB肉汤（Miller）	Thermo/Gibco	10855021	用于静态细菌培养及OD测定
培养皿（150 mm × 15 mm）	Fisher Scientific	FB0875714	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=快速搜索
PBS 1×			用于静态细菌培养及OD测定
氯化三苯基四氮唑	Alfa Aesar	A10870	https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/