暴露合成口腔细菌群落于模拟消化阶段

本文内容

摘要

本视频展示了在模拟口腔、胃和肠道消化过程中，对合成口腔微生物群落进行的活性评估。每个消化阶段结束后，对细菌存活数量进行定量，结果显示由于消化应激，细菌存活率呈逐步下降趋势。

方案

1. 细菌在以下条件下的存活情况 体外 胃肠道转运条件

注意：使用下述改良方法制备模拟消化液。所有稀释均使用超纯水进行。所有溶液均需通过0.22 µm滤膜过滤除菌，并在无菌条件下进行消化处理。

口腔消化：
1. 取3 mL细菌群落置于50 mL无菌离心管中，加入3 mL模拟唾液液（SSF），其成分为（单位：毫摩尔每升，mmol L⁻¹）：氯化钾（KCl），15.1；磷酸二氢钾（KH₂PO₄），3.7；碳酸氢钠（NaHCO₃），6.8；六水合氯化镁（MgCl₂·6H₂O），0.5；碳酸铵[(NH₄)₂CO₃]，0.06；盐酸（HCl），1.1；二水合氯化钙（CaCl₂·2H₂O），0.75。向SSF中添加75 U/mL的人唾液α-淀粉酶IX-A型及2 g/L猪胃黏蛋白（II型）。
2. 将混合物在37 °C、100 rpm条件下孵育2分钟。取2 mL样品用于DNA提取及流式细胞术定量分析（S1）。

2. 胃消化：

加入4 mL模拟胃液（SGF），其成分（单位：mmol L⁻¹）如下：KCl，6.9；KH₂PO₄，0.9；NaHCO₃，25；氯化钠（NaCl），47.2；MgCl₂·6H₂O，0.1；(NH₄)₂CO₃，0.5；HCl，15.6；CaCl₂·2H₂O，0.075。此外，SGF中还含有2 g/L来自猪胃的黏蛋白（Ⅱ型）。
测定pH值，必要时用1摩尔（1 M）HCl调节至pH 3。在37 °C、100 rpm条件下孵育。取2 mL样品（S2）。

3. 小肠消化：

向消化管中加入 4 mL 模拟肠液（SIF），其成分（单位：mmol L⁻¹）为：KCl，6.8；KH₂PO₄，0.8；NaHCO₃，85；NaCl，38.4；MgCl₂·6H₂O，0.33；HCl，8.4；CaCl₂·2H₂O，0.3。
如有需要，用 1 M 氢氧化钠（NaOH）调节 pH 至 7。在 37 °C、100 rpm 条件下孵育。取 2 mL 样品（S3）。

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材料

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