利用延时显微镜持续监测细菌中的生物噪声

摘要

来源： Chaimovitz, E. A., 等 生物噪声的连续测量 大肠杆菌 使用延时显微镜技术 视频实验期刊. (2021)

本视频通过使用延时显微镜追踪细菌生长和分裂过程中绿色荧光蛋白（GFP）荧光强度的波动，实现了对大肠杆菌（E. coli）中生物噪声的实时可视化。

方案

1. 准备显微成像样品
   1. 从水浴中取出培养瓶，擦净外壁，并使其冷却至室温（25 °C）。
      注意： 应在计时结束前约3分钟取出培养瓶。
   2. 以环形运动方式持续将3 mL凝胶倒入培养皿边缘。静置数分钟使其凝固。
   3. 用封口胶带密封培养皿，并用25 G针头刺若干小孔。将所有培养皿倒置，防止冷凝水滴落到凝胶表面。
   4. 将所有培养皿在4 °C下孵育30分钟，以确保完全凝固，同时抑制细胞有丝分裂。
      注意： 后续测量时，样品可在4 °C保存，但不超过一天。
   5. 按照制造商说明启动显微镜。
   6. 使用最低放大倍数的物镜找到初始焦平面，并启动自动对焦系统（AFS）。
   7. 如需使用油镜，将镜油滴加至物镜上，并通过载物台控制器（而非手动）移动培养皿以均匀铺展镜油，之后可再次启用自动对焦系统（AFS）。
   8. 在Z方向采用相对横截面模式，按照默认建议设置Z轴步进横截面。
      注意： 每5分钟采集一次明场图像，每20分钟采集一次荧光图像。在前30分钟内有时需要调整焦平面。预先加热显微镜培养箱和镜油，同时对样品进行冷藏，有助于减少初始阶段的失焦现象。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
35 mm 玻璃培养皿	Mattek	P35G-0.170-14-C	厚度与显微镜物镜匹配
琼脂糖	Lonza	5004	用于LB培养基制备
Eclipse Ti	Nikon		倒置显微镜
Immersol 518F	Zeiss	4449600000000	浸油
Parafilm 封口膜	Bemis	PM-996	文中简称为封口膜