克雷伯氏肺炎菌对竹材水解物的微好氧发酵

摘要

来源：Wei, D., 等，利用竹水解物为底物通过Klebsiella pneumoniae生产化学品。J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了在微氧和弱酸性条件下，通过在基于水解物的培养基中培养 Klebsiella pneumoniae，将竹源糖类转化为2,3-丁二醇的微生物转化过程。

方案

1. 野生型菌株生产2,3-丁二醇 肺炎克雷伯菌

1. 使用3 L竹子水解物作为培养基制备的溶剂。
2. 制备发酵培养基，其中包含4 g/L玉米浆、2 g/L (NH₄)₂SO₄、6 g/L K₂HPO₄、3 g/L KH₂PO₄和0.2 g/L MgSO₄。使用2.5 M NaOH将培养基pH调节至中性。将3 L已灭菌的发酵培养基加入5-L生物反应器中用于发酵。
3. 使用保存于-80°C低温冰箱中的K. pneumoniae菌种。
4. 对于种子培养，将含有50 mL LB（Luria-Bertani）培养基的250 mL三角瓶在37 °C、200 rpm振荡条件下过夜培养。LB培养基组成为10 g/L胰蛋白胨、5 g/L酵母提取物和10 g/L NaCl。注意：种子培养物的菌体密度应达到OD 2（600 nm处的光密度值）。
5. 将50 mL种子培养液接种至生物反应器中。维持培养体系pH为6.0，温度为37 °C。通气速率为2 L/min，搅拌速率为250 rpm，以形成微氧环境。
6. 在发酵过程中每2小时采集5 mL样品，并采用高效液相色谱法分析发酵液中各化学物质的浓度。
7. 使用微....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
高压灭菌器	SANYO	3780
生物反应器	Sartorius stedim biotech	Bostat Aplus
搅拌器	IKA	RW 20
高效液相色谱系统	Shimadzu Corp	20AVP
竹粉	购自中国浙江省		目数，50
纤维素酶	山东优泰生物化学有限公司		200 PFU/mL