使用甘油或二甲基亚砜对蓝藻菌株进行长期低温保存

摘要

来源：Lea-Smith, D. J., et al．模式蓝细菌物种中标记型与无标记突变体的构建．J. Vis. Exp. (2016)

本视频通过将浓缩的蓝细菌悬液与甘油或DMSO混合并在低温下保存，展示了蓝细菌菌株的冷冻保存方法，从而实现光合作用和遗传学研究中活性培养物的长期保藏。

方案

1. 培养基的制备

1. 制备 BG11 培养基
   1. 配制 100 倍浓缩的 BG11、微量元素和铁储备液（表 1）。
   2. 分别配制磷酸盐储备液、碳酸钠（Na₂CO₃）储备液、N-[三（羟甲基）甲基] -2-氨基乙磺酸（TES）缓冲液和碳酸氢钠（NaHCO₃）（表 1）。
   3. 对磷酸盐和 Na₂CO₃ 储备液进行高压灭菌。使用 0.2 µm 滤膜过滤灭菌 TES 缓冲液和 NaHCO₃。
   4. 通过混合 976 ml 水、10 ml 100x BG11、1 ml 微量元素和 1 ml 铁储备液来制备 BG11，并对溶液进行高压灭菌。待溶液冷却至室温后，加入 1 ml 磷酸盐储备液、1 ml Na₂CO₃ 储备液和 10 ml NaHCO₃。
   5. 对于固体 BG11 培养基，向一个烧瓶中加入 15 g 琼脂和 700 ml 水。向第二个烧瓶中加入 3 g 硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃）、226 ml 水、10 ml 100x BG11、1 ml 微量元素和 1 ml 铁储备液。将两种溶液分别高压灭菌。....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
NaNO₃	Sigma	S5506
MgSO₄·7H₂O	Sigma	230391
CaCl₂	Sigma	C1016
柠檬酸	Sigma	C0759
Na₂EDTA	Fisher	EDT002
H₃BO₃	Sigma	339067
MnCl₂·4H₂O	Sigma	M3634
ZnSO₄·7H₂O	Sigma	Z4750
Na₂MoO₄·2H₂O	Sigma	331058
CuSO₄·5H₂O	Sigma	209198
Co(NO₃)₂·6H₂O	Sigma	239267
柠檬酸铁铵	Sigma	F5879
K₂HPO	Sigma	P3786
Na₂CO₃	Fisher	SODC001
TES	Sigma	T1375
NaHCO₃	Fisher	SODH001
HEPES	Sigma	H3375
氰钴胺	Sigma	47869
Na₂S₂O₃	Sigma	72049
Bacto 琼脂	BD	214010
蔗糖	Fisher	SUC001
90 mm 三通气式培养皿	Greiner	633185
0.2 µm 滤膜	Sartorius	16534
100 ml 锥形瓶	Pyrex	CON004
Parafilm M 100 mm × 38 m	Bemis	FIL003
Phusion 高保真 DNA 聚合酶	Phusion	F-530
琼脂糖	Melford	MB1200
DNA 纯化试剂盒	MoBio	12100-300
限制性内切酶	NEB
T4 连接酶	Thermo Scientific	EL0011
LB 肉汤	Invitrogen	12795-027
MES	Sigma	M8250
硫酸卡那霉素	Sigma	60615
氨苄青霉素	Sigma	A9518
GeneJET 质粒小提试剂盒	Thermo Scientific	K0503
14 ml 圆底管	BD falcon	352059
GoTaq G2 Flexi DNA 聚合酶	Promega	M7805
425–600 µm 玻璃珠	Sigma	G8772
甘油	Sigma	G5516
DMSO	Sigma	D8418
荧光灯管	Gro-Lux	69
HT multitron 光生物反应器	Infors