人类肺组织中细菌定位及宿主相互作用的成像

Abstract

来源： Mills， B. 等， 《通过共焦点激光内镜对人体肺组织中新型细菌特异性探针进行光学筛选》。 J. Vis. Exp. （2017年）

本视频演示了利用纤维共聚焦荧光显微镜实时成像悬浮液和肺部组织中的荧光标记 金黄色葡萄球 菌。

Protocol

1. 利用共焦激光内镜（CLE）进行数据收集
   1. 设置完成后，会打开一个窗口，用于选择存储位置和文件前缀。选择用于数据存储的目标文件夹，并相应命名前缀。
   2. 将脚踏板放置在操作员方便作的位置。左踏板：激光开关;中置踏板：暂停;右踏板：录音/停止。
      注意： 激光控制也可以通过屏幕上的控制键来作。
   3. 点击屏幕上的“开始”或踩左脚踏板开启激光。该设备将开始采集，使用100%激光功率和12帧/秒（默认设置）的帧率。
      注意： 对于其他应用，根据样品类型，这些设置可以在屏幕上调整。
   4. 对每个细菌悬浮样本进行成像。
      1. 插入FCFM（纤维共聚焦荧光显微镜）成像纤维的远端，缓慢移动纤维通过悬浮液以探测样品。
      2. 通过踩右脚踏板或选择屏幕上的录制控制，可以录制任意长度的视频（最长10分钟），因为光纤会缓慢绕着采样移动。
      3. 在样品间隙用8% H₂O₂ 清洁FCFM成像纤维的远端，并用透镜清洁组织。​
         注意： 典型的视频长度为10-30秒，足以满足 体外 成像。
   5. 对每个肺组织样本进行成像。
      1. 将FCFM成像纤维的远端插入样本，确保纤维末端与组织直接接触。轻轻移动成像纤维末端以探测样品。
         注意： 将纤维末端从组织上抬起，会使组织从焦点面移开;然而，这也可用于成像未附着于组织的标记细菌。
      2. 通过踩右脚踏板或选择屏幕上的录制控制，可以录制任意长度的视频（最长10分钟），因为光纤会缓慢绕着采样移动。
         注意： 通常，30秒的视频长度 足以用于组织 体外成像。
      3. 用镜头清洁纸和8%的H₂O₂ 在样品间隙清洁FCFM成像纤维的远端。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1-14 微型降压机	科幻	90616	小型台式微型离心机
96孔板	科宁	3370	分析板
Calcein AM	西格玛·奥尔德里奇	17783	商业荧光染料
Cellvizio 488 nm 研究 CLE	莫纳凯亚科技公司	LC-0001-488	共焦点激光内窥镜设备
克莱托普-S	克莱托普	14110601	纤维清洁剂
埃彭多夫（1.5毫升）	埃彭多夫	30120086	1.5 mL 微量冲刺管
Gibco磷酸盐缓冲生理盐水	赛莫飞世尔科学	10010023	PBS - 洗媒体
IC-Viewer	莫纳凯亚科技公司	LW-0001	用于研究用CellVizio 488纳米系统的数据收集与处理软件
非标准研究 AlveoFlex 488 nm	莫纳凯亚科技公司	MP-0002-AF3	纤维化共聚焦荧光显微镜纤维
Quanti Kit 488 nm	莫纳凯亚科技公司	LQ-0005	CellVizio 488 系统的校准套件
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923	空军交通管制委员会	25923	本研究中使用的细菌菌株
半微分光光度法的黑壳	西格玛·奥尔德里奇	C5416-100EA	用于分光光度测量
热混合器舒适度	埃彭多夫	41102422	带摇晃的台式加热器