量化细菌脱落以评估感染传播潜力 果蝇

摘要

来源：Siva-Jothy, J. A., 等，口腔细菌感染与黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的细菌排出。J. Vis. Exp. (2018)

本视频演示了监测细菌排出的实验步骤 黑腹果蝇 通过将感染的果蝇在多个含食物的试管间转移，回收脱落的细菌，并通过系列稀释和平板接种法对可存活菌落进行定量。

方案

1. 测量细菌脱落
   1. 同时测量脱落量与体内载量。
   2. 感染后，将单只果蝇转移至含有约 50 µL Lewis 培养基的 1.5 mL 微离心管中，孵育 24 小时。
   3. 取出果蝇用于测定体内载量，并用 100 µL 1x PBS（磷酸盐缓冲液）剧烈涡旋振荡 3 秒，清洗离心管。
   4. 通过在 LB（Luria-Bertani）营养琼脂平板上接种，测定该清洗液中的菌落形成单位（CFU）。
   5. 感染后，将单只果蝇转移至含有约 50 µL Lewis 培养基的 1.5 mL 微离心管中，孵育 24 小时。
   6. 将果蝇转移至新的含有约 50 µL Lewis 培养基的微离心管中，继续孵育 24 小时。用 100 µL 1x PBS 剧烈涡旋振荡 3 秒，清洗被污染的原管。
   7. 通过在 LB 营养琼脂平板上接种，测定该清洗液中的菌落形成单位（CFU）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
小瓶	Sarstedt Ltd.	58.49	聚苯乙烯平底管，75 mm × 23.5 mm，23 ml
琼脂	Sigma-Aldrich	A7002	琼脂，灰分含量 2.0–4.5%
红糖	Bidvest	66032	浅色软质红糖
玉米粉	Dove's Farm		有机玉米粉
Fermipan 酵母	Bidvest	96360	干性即食酵母
培养皿	Fisher Scientific UK Ltd.	15788517	X600 型培养皿，90 mm × 16.2 mm，无菌，三重通气
Eppendorf 管（1.5 ml）	Sarstedt Ltd.	72.690.001	Sarstedt 微量离心管，锥底，推盖式，1.5 ml，标准中性
乙醇	VWR International Ltd.	20821.33	分析纯无水乙醇，ANALAR NP ACS/R.PE 级
LB 培养基（Miller 配方）	Fisher Scientific UK Ltd.	BP1426	每升含胰蛋白胨 10 g、酵母提取物 5 g、氯化钠 10 g
96 孔微孔板	Scientific Laboratory Supplies Ltd.	353072	Falcon 96 孔透明平底 TC 处理聚苯乙烯细胞培养微孔板，带盖，无菌
涡旋振荡器	Fisherbrand		Whirlimixer 75 W，50–60 Hz，220–240 V
10 µL 移液器吸头	Greiner Bio-one Inc	741015	Gilson 风格易装吸头，带刻度，透明，可补充装，960 个/包
200 µL 移液器吸头	Greiner Bio-one Inc	741065	Gilson 风格易装吸头，带刻度，透明，可补充装，960 个/包
1000 µL 移液器吸头	Greiner Bio-one Inc	741045	Gilson 风格易装吸头，带刻度，透明，可补充装，960 个/包
20 µL 滤芯移液器吸头	Greiner Bio-one Inc	774288	Gilson 风格滤芯吸头，透明，蓝色架，单个包装，RNase/DNase 无残留，10 架，每架 96 个
200 µL 滤芯移液器吸头	Greiner Bio-one Inc	739288	Gilson 风格滤芯吸头，透明，蓝色架，单个包装，RNase/DNase 无残留，10 架，每架 96 个
1000 µL 滤芯移液器吸头	Greiner Bio-one Inc	740288	Gilson 风格滤芯吸头，透明，蓝色架，单个包装，RNase/DNase 无残留，10 架，每架 60 个