气溶胶递送 结核分枝杆菌 用于小鼠模型中肺部感染的研究

摘要

来源：Mueller, A., 等．一种研究结核病与疟疾共感染的实验模型：基于Mycobacterium tuberculosis和Plasmodium berghei自然传播条件下的研究．J. Vis. Exp. （2014）

本视频展示了使用基于雾化器的暴露舱系统将结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis (Mtb)）以气溶胶形式递送至小鼠，以诱导肺部感染，从而建立一种可控且可重复的动物模型，用于在活体条件下研究结核病的空气传播机制以及宿主与病原体之间的相互作用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 使用Glas-Col气溶胶感染舱对小鼠进行结核分枝杆菌（Mtb）气溶胶感染

对实验动物进行气溶胶感染时，标准化接种结核分枝杆菌（Mtb，Mycobacterium tuberculosis）的最佳方法是使用已知CFU（菌落形成单位）滴度的冻存菌种。制备菌种储备液时，需将Mtb在添加OADC（油酸、白蛋白、葡萄糖、过氧化氢酶）增补剂和0.05%吐温-80（作为分枝杆菌的碳源）的Middlebrook 7H9液体培养基中培养，同时采取措施防止细菌聚集。收获菌液时，培养物的OD（光密度）应≤1。当OD值过高时，细菌聚集增加，活力下降。将1 ml分装菌液于-80 °C保存。通过将三个独立冻存管的菌液进行10倍系列稀释，取样接种于添加0.5%甘油、1 g/L天冬酰胺和OADC的7H11琼脂平板，在37 °C培养4周后计数菌落，以确定冻存菌液中的活菌CFU数量。随后按以下所述方法进行气溶胶感染。

1. 解冻已知CFU滴度的Mtb菌种，使用带27 G针头的1 ml注射器将菌悬液轻轻吹打混匀5次，以分散细菌团块。避免产生气溶胶。
2. 根据所需感染剂量，将适量的分枝杆菌菌液转移至含有6 ml无菌磷酸盐缓冲液（PBS）的50 ml离心管中。

注意：通过改变该悬液中微生物的数量，可改变携带气溶胶液滴的细菌比例....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
布腊通	舒尔克		活性成分：醛类（甲醛、戊二醛、乙二醛、己醛）
Middlebrook 7H9	西格玛	M0178	用于结核分枝杆菌液体培养
Middlebrook 7H11	BD 生物科学	283810	结核分枝杆菌培养用琼脂培养基
Midlebrook OADC 增菌培养基	BD 生物科学	212240	添加至 7H9 和 7H11 中用于结核分枝杆菌培养
吸入暴露系统	Glas-Col
文丘里雾化器	Glas-Col