建立小鼠慢性铜绿假单胞菌皮肤伤口感染模型

摘要

来源： de Vries, C. R., 等一种慢性延迟接种模型 铜绿假单胞菌 伤口感染 视频实验杂志 (2020)

本视频展示了将发光的Pseudomonas aeruginosa延迟接种至一只背部有两个全层皮肤伤口的小鼠体内，伤口表面覆盖有透明薄膜敷料。该方法有助于生物膜的形成以及慢性感染的建立。通过定期进行生物发光监测，可对细菌负荷量进行定量，并实现对感染进程的长期跟踪。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 接种Pseudomonas aeruginosa

1. 将过夜培养的PAO1:lux菌液稀释至OD₆₀₀ = 0.05，在含有100 µg/mL羧苄青霉素的75 mL溶菌肉汤（LB）培养基中培养细菌，直至菌液达到对数生长期初期（OD₆₀₀≈0.3）。此过程大约需要2–3小时。
2. 将PAO1:lux用磷酸盐缓冲液（PBS）稀释至浓度为(7.5 ± 2.5) x 10² CFU/mL。务必准备过量的接种物，以确保有足够的体积，并为实验后平板接种留出余量。若在不同场所之间转运，应使用双层密闭容器，并置于明确标记为“生物危害”的防漏箱中。
3. 所有操作均需在 P. aeruginosa 使用经批准的个人防护装备，在动物生物安全二级（ABSL-2）认证的生物安全柜（BSC）中操作小鼠。对于电子天平等可重复使用的设备，应使用保鲜膜覆盖，以防止污染。
4. 使用3%异氟烷麻醉小鼠。称量小鼠体重并记录。皮下注射预热的无菌0.9%氯化钠溶液，每侧 flank 注射250 µL，共500 µL。
5. 如果小鼠的透明敷料在过夜后脱落，应小心去除由此形成的结痂，并更换新的敷料。
6. 使用500 µL结核菌素27 G带安全帽的注射器，通过透明薄膜敷料向每处伤口注入40 µL的PAO1:lux悬液。为防止对侧交叉污染，非接种/PBS对照组伤口应使用不同的小鼠。
7. 将小鼠放回垫有加热垫的笼子中，并监测直至其苏醒。所有小鼠应单独饲养在不同的笼子中，以防止交叉污染。
8. 在笼底将高热量营养补充剂软膏夹在食物颗粒之间提供。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.9% 氯化钠注射液	Hospira	2484457
C57BL/6J 雄性小鼠	The Jackson Laboratory	664
1× 磷酸盐缓冲液（PBS）	Corning	21-040-CV
Press and Seal 保鲜膜	Glad	n/a
安全型胰岛素注射器，1/2 mL，30 G × 5/16 英寸	BD	305934
电子天平	Ohaus Scout Pro	SP202
Supplical 营养补充剂	Henry Schein Animal Health	29908