在成年蚊子中建立明确的肠道细菌群落

摘要

来源：Liu, X., et al. 使用抗生素处理蚊子的细菌口服饲喂实验。 J. Vis. Exp. (2020)

本视频展示了利用含抗生素的蔗糖溶液清除蚊虫肠道内源性微生物群的方法。随后通过膜饲喂系统递送细菌悬液，对蚊虫肠道进行可控的重新定植，以建立定义明确的蚊虫肠道细菌种群。

方案

1. 抗生素处理与细菌重新引入

1. 制备抗生素溶液。
   1. 称取适量蔗糖、青霉素和链霉素，配制含20单位青霉素和20 µg链霉素每毫升的10%蔗糖溶液。
2. 用抗生素溶液饲喂蚊子。
   1. 将蚊子置于4 °C下麻醉3–5分钟，转移至纸杯中，杯口覆盖纱布并用胶带固定，防止蚊子逃逸。
   2. 将无菌棉球浸入抗生素溶液，小心放置于蚊子杯内。使用前挤压棉球，避免滴液导致蚊子溺亡。
   3. 用直径10 cm的培养皿覆盖棉球，防止水分蒸发。连续三天，每天更换棉球两次。
3. 细菌悬液的制备
4. 用分光光度计测定细菌溶液，取1 OD（OD₆₀₀）的细菌悬液加入1 mL离心管中，在4 °C下以5,000 × g离心5分钟。
5. 弃去上清液，向1.5 mL离心管中加入1 mL无菌1× PBS缓冲液用于重悬沉淀。
6. 在4 °C下以5,000 × g离心5分钟；弃去上清液。
7. 重复步骤2.4.2和2.4.3。
8. 向细菌沉淀中加入200 µL无菌1×磷酸盐缓冲液（PBS）。
9. 向无菌1.5 mL离心管中加入600 µL 10%蔗糖溶液、200 µL 10 mm腺苷5′-三磷酸（ATP）（作为摄食刺激剂）和200 µL细菌悬液，涡旋混匀。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
腺苷-5′-三磷酸二钠盐水合物	Sigma	A2383	腺苷-5′-三磷酸二钠盐水合物已用于配制腺苷三磷酸（ATP）标准溶液
Hemotek 膜饲系统	Hemotek		饲喂系统的组件，包括 Hemotek 温度控制器、饲喂器外壳组件和金属饲喂器组件。
Parafilm	Sangon Biotech	F104002	4 英寸 × 125 英尺
培养皿	Sangon Biotech	F611203
普鲁卡因青霉素 G 盐水合物	Sangon Biotech	A606248	白色粉末。溶于水，溶于甲醇，微溶于水和乙醇
硫酸链霉素	Sangon Biotech	A610494	硫酸链霉素是一种氨基葡萄糖类抗生素，可干扰原核生物蛋白质的合成。
蔗糖	Sangon Biotech	A502792	溶于水、乙醇和甲醇，微溶于甘油和吡啶。
10X PBS 缓冲液	Sangon Biotech	E607016	本产品为 10X 溶液，使用前请稀释 10 倍。pH 值为 7.4。