利用生物发光技术在小鼠模型中可视化尿路感染

摘要

来源：Luyts, N., et al. 利用生物发光成像对小鼠尿路感染及其治疗进行纵向随访。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频展示了利用生物发光的E. coli注入膀胱，在小鼠模型中诱导并追踪尿路感染的过程，其中发生细菌黏附、侵入及胞内复制。生物发光操纵子发出的光在感染进展过程中作为细菌载量的实时标记。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 动物接种

1. 动物的准备
   1. 根据研究问题、基因敲除品系的可获得性、实验细节以及尿路感染（UTI）易感性的差异，选择合适的小鼠品系。需注意，雌性小鼠更易于进行经尿道插管操作。避免使用8周龄以下的动物，因其免疫系统尚未发育成熟。本实验中使用了12周龄的雌性C57Bl/6J小鼠。
   2. 提前订购实验动物，并让其充分适应环境，理想情况下适应7天。将动物分组饲养于独立通风的笼具中，置于标准的12小时光照/12小时黑暗循环条件下。
   3. 剃除动物腹部区域的毛发以减少信号损失。切勿使用脱毛膏，因其可能迅速灼伤动物皮肤。剃毛时，用非惯用手紧握动物颈背部皮肤及后肢以固定动物，同时用惯用手进行剃毛。 Alternatively, shave under isoflurane anesthesia.
      注意： 动物在成像前2天进行剃毛，因为动物会进一步舔舐清理剃毛区域。
   4. 提供水和标准食物 随意摄取 在整个实验过程中，动物可自由饮水。但在灌注前2小时需限制饮水，以尽量减少灌注时的膀胱容积。
   5. 将无菌的24 G套管针头安装在100 µL注射器上，并用细菌溶液充满注射器。
      注意： 为确定背景发光，在滴注前获取基线图像（....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
麻醉蒸发器	Harvard Apparatus Limited	N/A	https://www.harvardapparatus.com/harvard-apparatus-anesthetic-vaporizers.html
拜耳百灵 100 mg/mL	Bayer	N/A	恩诺沙星
BD Insyte Autoguard 24 GA	BD	382912	黄色套管针，用于滴注时使用无菌塑料针头
C57Bl/6J 小鼠	Janvier	N/A
Centrifuge 5804R 离心机	Eppendorf	EP022628146
Dropsense 16	Unchained Labs	Trinean	用于测量 600 nm 处的光密度（OD）
Dulbecco 磷酸盐缓冲液，Gibco 品牌	ThermoFisher Scientific	货号 14040-083
70% 变性乙醇，5 L	VWR International	85825360
Falcon 14 ml 圆底聚苯乙烯管，带 snap-cap 盖	Corning	352057
Falcon 50 ml cellstart	Greiner	227285
Hamilton GASTIGHT 注射器，PTFE 鲁尔锁，100 µL	Sigma-Aldrich	26203	确保以 50 µL 缓慢接种细菌
接种环	Roth	6174.1	手柄：货号 6189.1
Iso-Vet 1000 mg/g	Dechra Veterinary Products	N/A	异氟烷
IVIS Spectrum 活体成像系统	PerkinElmer	货号 124262	成像设备