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为宿主-病原体相互作用研究制备溶血性Staphylococcus aureus培养物

2026年2月2日

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

来源：Behera, R.K. et. al., 一种基于荧光的细菌基因调控研究方法在感染组织中的应用。 J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了制备溶血性Staphylococcus aureus培养物的方法，以标准化细菌生长并实现代谢同步，用于宿主-病原体相互作用研究。

方案

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. 细菌接种物的制备
    1. 从冷冻甘油菌种中将目标金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）菌株划线接种至血琼脂平板上进行分离。于37 °C培养16–24小时，根据其裂解红细胞（RBCs）并形成清晰透明溶血环的能力确认溶血表型。
    2. 取各菌株的单个菌落接种于4 mL无菌胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）中，置于无菌玻璃试管内，启动过夜培养。将试管置于约70°倾斜、转速为每分钟70转（RPM）的试管旋转仪中，于37 °C旋转培养16–24小时。
    3. 使用分光光度计测定步骤2.1.2中培养物在600 nm处的光密度（OD600），以无菌培养基作为空白对照。将菌液用无菌胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）稀释至OD600为0.05，分别加入装有25 mL培养基的125 mL DeLong三角烧瓶中（瓶体体积与培养液体积比为5:1），置于水浴摇床中，在37 °C、280 RPM条件下振荡培养，以确保培养物充分传热。
      注意：接种物的培养可通过多种方式进行，此处仅提供一种使细胞生长至对数期的方法。无论采用何种方法，关键在于始终如一地使用相同方法制备接种用菌液。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
5% 绵羊血Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)A10 
轨道摇床水浴箱New Brunswick InnovaNA 
胰蛋白胨大豆肉汤VWR90000-376 
紫外-可见分光光度计Beckman Coulter-DU350NA 

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