感染分枝杆菌脓肿的斑马鱼胚胎宿主-病原体相互作用的活影像

摘要

来源： Bernut， A. 等人。《斑马鱼胚胎中脓 肿分枝杆菌 的发病机制与解析》。 J. Vis. Exp. （2015年）

本视频演示了一种方案，利用表达荧光巨噬细胞并感染荧光脓 肿分枝杆 菌粗株的转基因斑马鱼胚胎，以可视化宿主与病原体的相互作用。它揭示了细胞外连接如何促进免疫逃避，促进细菌存活和宿主细胞损伤。

方案

1. 脓肿分枝杆菌感染的实时影像

1. 在35毫米培养皿中，将经三针麻醉的胚胎置于1%低熔点琼脂糖中，进行荧光显微镜观察前。倒置共聚焦显微镜使用玻璃底盘，直立共聚焦显微镜使用单腔凹槽载玻片。将胚胎定向到理想位置，并用含三卡因的鱼水覆盖已凝固的琼脂糖。
2. 使用带有10倍物镜的落射荧光显微镜，进行序列式荧光采集和整个胚胎的透射图像。或者，使用40倍或63倍物镜的共焦显微镜，观察感染后免疫细胞的活动。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
低融化琼脂糖	西格玛-奥尔德里奇
乙基3-氨基苯甲酸甲磺酸盐（三氯胺）	西格玛-奥尔德里奇	A5040