1. 人类粪便微生物群对胞外多糖（EPS）的降解<ol><li>取0.2 μL发酵上清液，点样于预涂硅胶-60薄层色谱（TLC）铝板上，然后用吹风机吹干。</li><li>将铝板置于20 mL甲酸/正丁醇/水（6:4:1, v:v:v）溶液中展开，再用吹风机吹干。</li><li>将铝板浸入间苯二酚试剂中染色，随后用吹风机吹干。<ol style='list-style-type:decimal;'><li>配制间苯二酚试剂：将900 mg地衣酚溶于25 mL蒸馏水中，然后加入375 mL乙醇。随后缓慢加入浓硫酸，并充分混匀。</li></ol></li><li>将铝板在烘箱中120 °C加热3分钟，通过测定薄层色谱条带评估胞外多糖（EPS）的降解情况。</li></ol>

<table class='ck-table-resized'><tbody><tr><td>烘箱</td><td>上海一恒科学仪器有限公司</td><td>DHG-9240A</td><td>用于加热和烘烤</td></tr><tr><td>乙醇</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td>用于制备维生素K1</td></tr><tr><td>甲酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>399388</td><td>用于薄层色谱（TLC）</td></tr><tr><td>地衣酚</td><td>Solarbio</td><td>C8380</td><td>用于制备显色板</td></tr><tr><td>正丁醇</td><td>ChemSpider</td><td>71-36-3</td><td>用于薄层色谱（TLC）</td></tr><tr><td>间苯三酚</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>447420</td><td>用于制备间苯三酚试剂</td></tr><tr><td>硫酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>150692</td><td>用于制备间苯三酚试剂</td></tr><tr><td>薄层色谱铝箔板</td><td>MerckMillipore</td><td>116835</td><td>用于薄层色谱（TLC）</td></tr></tbody></table>

进行薄层色谱分析以评估细菌胞外多糖降解

Performing Thin-Layer Chromatography to Assess Bacterial Exopolysaccharide Degradation

来源：<a href='https://app.jove.com/v/59725/analysis-interactions-between-endobiotics-human-gut-microbiota-using'>Hu, Y., et al。利用体外批次发酵系统分析内源性物质与人体肠道微生物群之间的相互作用。J. Vis. Exp. (2019)</a>本视频展示了利用薄层色谱法（TLC）评估人类粪便微生物群对胞外多糖（EPS）降解作用的方法。通过TLC根据发酵上清液中EPS片段的大小和极性进行分离，随后经碳水化合物特异性染色后以显色条带形式进行可视化观察。

来源：Hu, Y., 等. 利用体外批次发酵系统分析内源性物质与人体肠道微生物群的相互作用. J. Vis. Exp. ...

https://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/24396/24396_article_thumb_24396.jpg

从含有已降解和未降解胞外多糖（EPS）的发酵上清液开始。这些胞外多糖是在发酵过程中获得的，其中各上清液中不同的粪便细菌群落对胞外多糖的作用方式各不相同。将上清液点样于预涂有极性固定相的薄层色谱板底部附近。将板风干，然后放入含有移动相的展开 chamber 中，移动相的极性应低于固定相。随着流动相的上升，胞外多糖根据其极性和大小进行迁移。大分子且未降解的胞外多糖（EPS）与固定相有较强的相互作用，因而停留在起始位置附近。较小的降解片段结合较弱，并随流动相向上迁移。取出培养板并风干。将平板浸入与胞外多糖（EPS）发生反应的碳水化合物染色试剂中。将平板风干，然后加热以脱水EPS并形成有色条带。在加样孔附近出现单一条带表明EPS未降解，而多条带则表明细菌对EPS造成了降解。将0.2微升发酵上清液加样至每块预先包被的硅胶60薄层层析铝板上，并轻轻晃动以铺展。随后，使用热风电吹风干燥。将样品板的一端浸入20毫升的甲酸：正丁醇：水溶液中数分钟，直至电泳迁移接近另一端。然后用镊子取出板子，用吹风机吹干。接着，将板子浸入间苯二酚试剂中两分钟进行染色，再进行干燥。将平板转移至120摄氏度的烘箱中加热三分钟。然后拍摄平板图像，通过测量TLC条带来评估EPS的降解情况。

performing-thin-layer-chromatography-to-assess-bacterial

Research

科研

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

微生物学

Bacterial Pathogenesis and Host Interactions

细菌致病机制与宿主相互作用

bacterial-pathogenesis-and-host-interactions

Bacterial Virulence & Biofilms

细菌毒力与生物膜

进行薄层色谱以评估细菌外多糖降解

138 次观看. 从含有降解和未降解外多糖（EPS）的发酵上清液开始。这些EPS是在发酵过程中获得的，每个上清液中不同的粪便细菌群体对EPS的作用不同。在预涂极性固定相的薄层色谱板底部附近发现上清液。将板风干，然后将其放入极性低于固定相的流动相腔室中。随着流动相的上升，EPS根据其极性和大小迁移。大型未降解的EPS与固定相强烈相互作用，并保持在...

进行薄层色谱分析以评估细菌胞外多糖降解

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姓名	公司	目录编号	评论
烘箱	上海一恒科学仪器有限公司	DHG-9240A	用于加热和烘烤
乙醇	Sigma-Aldrich	E7023	用于制备维生素K1
甲酸	Sigma-Aldrich	399388	用于薄层色谱（TLC）
地衣酚	Solarbio	C8380	用于制备显色板
正丁醇	ChemSpider	71-36-3	用于薄层色谱（TLC）
间苯三酚	Sigma-Aldrich	447420	用于制备间苯三酚试剂
硫酸	Sigma-Aldrich	150692	用于制备间苯三酚试剂
薄层色谱铝箔板	MerckMillipore	116835	用于薄层色谱（TLC）