小鼠慢性肠道感染模型中组织细菌载量的定量分析

摘要

来源：Lo, B. C., 等。慢性沙门氏菌感染诱导的肠道纤维化。J. Vis. Exp. (2019)

该视频展示了在链霉素耐药细菌慢性感染的小鼠模型中，细菌载量的定量方法 沙门氏菌 typhimurium 安乐死后进行无菌解剖，采集盲肠和脾脏组织，使用钢珠均质化以释放细菌，并进行系列稀释。将稀释液接种于选择性琼脂平板，计数可见菌落，以估算肠道及全身组织每克中的细菌载量。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 准备 沙门氏菌 小鼠口服灌胃用鼠伤寒沙门氏菌ΔAroA培养物

1. 从一管冻存的甘油菌种中 S. 鼠伤寒沙门氏菌 ΔAroA，使用含100 μg/mL链霉素的LB琼脂培养基（Luria-Bertani琼脂），用无菌接种环划线接种。37 °C过夜培养。划线平板可在4 °C保存最多一周。
2. 感染前一天，将0.5 g链霉素溶解于2.5 mL水中配制抗生素溶液。经滤膜除菌后，使用带橡胶头的22G灌胃针和1 mL注射器，对小鼠进行口服灌胃，每只给予100 μL链霉素溶液（每剂量含链霉素20 mg）。用接种环取单个菌落，接种至含3 mL LB液体培养基（含50 μg/mL链霉素）的培养管中。孵育 沙门氏菌 37 °C、200 转/分钟（RPM）振荡培养，有氧过夜培养。
3. 在感染当天，通过将过夜培养物连续进行两次1/10稀释，制备最终感染剂量 沙门氏菌 在无菌磷酸盐缓冲液（PBS）中培养，制备成终体积为100 μL的接种液，其中约含3 × 10⁶菌落形成单位（CFU）。
4. 使用带有橡胶球头的22G灌胃针和1 mL注射器，对每只小鼠灌胃100 μL已配制好的溶液 沙门氏菌
   注意： 准备 沙门氏菌....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2 ml 圆底安全锁扣管	Eppendorf	22363344
不锈钢珠	Qiagen	69989
磷酸盐缓冲液（PBS）	Gibco	10010031
大孔径移液器吸头	Fisher	2707134
2 mL 大容量深孔板	Sarstedt	82.1972.002
灌胃针头	FST	18061-22
硫酸链霉素	Sigma	S9137
混合研磨仪	Retsch	MM