慢性肠道感染小鼠模型中组织细菌负荷的定量化

Abstract

资料来源： Lo， B. C. 等人。慢性沙门氏菌感染诱发肠道纤维化。 J. Vis. Exp. （2019）

该视频展示了在小鼠模型中对慢性感染链霉素抗性 沙门氏菌（Salmonella typhimurium ）细菌负荷的定量化。安乐死和无菌解剖后，会采集盲肠和脾脏组织，用钢珠均质释放细菌，并连续稀释。稀释液被镀在选择性琼脂上，并计数可见菌落以估算肠道和全身部位每克组织的细菌负荷。

Protocol

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会审查。

1. 用于小鼠口服胃囊的沙门氏菌Typhimurium ΔAroA培养的制备

1. 从冷冻的 S. Typhimurium ΔAroA甘油库存中，用含有100 μg/mL链霉素的Luria-Bertani琼脂（LB琼脂）制备一条条线板，并配有无菌接种环。在37°C下孵育一夜。条纹盘可在4°C下保存最长一周。
2. 感染前一天，将0.5克链霉素溶于2.5毫升水中制备抗生素。在对链霉素溶液进行过滤消毒后，用带球形的22克肠针和1毫升注射器，注入100微升链菌素溶液（每剂20毫克链霉素），口服给小鼠进行胃管处理。使用接种环，在培养管中与单一菌落接种3毫升LB肉汤（50 μg/mL链霉素）。 在 37°C的有氧培养下，以每分钟200转（RPM）振动，进行有氧培养。
3. 感染当天，通过在无菌磷缓冲生理盐水（PBS）中连续两次1/10稀释沙 门氏菌 培养液，准备最终感染剂量。这将形成一个约100微升的接种物，内含约3个×106个菌落形成单元（CFU）。
4. 使用带球形的22克胃肠针和1毫升注射器，将每只小鼠吸入100微升的 沙门氏菌。
   注意： 使用无菌技术制备 沙门氏菌 培养物。通过在LB琼脂上连续稀释链霉素进行镀层....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2毫升圆底保险锁管	埃彭多夫	22363344
不锈钢珠	奇根	69989
PBS	吉布科	10010031
大孔吸管头	费舍尔	2707134
2 mL 超块板	萨斯泰特	82.1972.002
加维奇针	FST	18061-22
链霉素硫酸盐	西格玛	S9137
搅拌机	雷奇	嗯