一种用于研究致病性转变的小鼠模型 肺炎链球菌 继发性病毒感染

摘要

来源： Lenhard, A. 等 一种小鼠模型用于研究转变过程 肺炎链球菌 从定植者到病原体：病毒共感染重现年龄加剧的疾病进程 视频实验杂志 (2022)

本视频展示了一种小鼠共感染模型，其中流感病毒引发向 肺炎链球菌 从定植者到病原体。该内容概述了细菌定植、病毒感染及疾病进展所涉及的各个步骤。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。 

1. 采用生物膜培养的病原体对小鼠进行鼻内接种 肺炎链球菌 (肺炎链球菌（S. pneumoniae）

1. 购买小鼠并在所需年龄时使用。
   注意：建议使用 3–4 个月龄的小鼠模拟年轻宿主，使用 21–24 个月龄的小鼠模拟 65 岁以上的老年个体 >65 岁。本文所示数据来自 C57BL/6 雄性小鼠。
2. 将生物膜培养的细菌分装样品置于冰上解冻，于 1,700 × g 离心 5 分钟。小心移除并弃去上清液，避免扰动沉淀物；用 1 mL 磷酸盐缓冲液（PBS）重悬沉淀以洗涤细菌，再次于 1,700 × g 离心 5 分钟。弃去上清液，并将沉淀重悬于所需体积中，以达到目标浓度（鼻内接种建议浓度为 5 × 10⁶ 菌落形成单位（CFU）/10 µL）。通过将制备好的接种物涂布于血琼脂平板，确认接种细菌的数量。
3. 通过向每侧鼻孔滴加 5 µL 稀释后的接种物，使小鼠鼻内接种 5 × 10⁶ CFU 细菌。操作时务必牢固握住小鼠并固定其头部，直至液体完全吸入（通常在滴加后数秒内完成）。此步骤应在无麻醉状态下进行，以防止接种物发生肺部吸入。

2. 使用甲型流感病毒（IAV）进行病毒感染

1. 在鼻内接种后48小时 S. pneumoniae将感兴趣的流感病毒（IAV）毒株在冰上解冻。
   注意： 本文所展示的数据使用了一株小鼠适应性流感病毒 A/PR/8/34 H1N1 获得 通过 协作交流
2. 病毒解冻后，用 PBS 将病毒稀释至所需浓度；气管感染建议使用 20 PFU/50 µL，鼻腔感染建议使用 200 PFU/10 µL。对于假感染组和仅细菌组，使用 PBS 接种小鼠。
3. 在小鼠麻醉前，将其眼部涂抹眼用润滑剂。使用 5% 异氟烷对小鼠进行麻醉，并通过牢固捏压脚趾确认麻醉效果。
4. 动物麻醉后，立即将其从异氟烷麻醉舱中取出，并使用钝头镊子将舌头拉出口腔，通过气管内滴注50 µL（20 PFU）的IAV感染小鼠。
5. 将小鼠放入单独的笼子中，并持续观察直至完全恢复（能够维持胸卧位，即能够胸部朝上躺卧）。
6. 恢复后，立即采用1.3步骤中的接种方法，通过鼻内接种给小鼠注入10 µL（200 PFU）的IAV。
7. 经相同感染组的单一或双重细菌和病毒感染后，与其他组分离的小家鼠。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
4-氨基苯甲酸	Fisher	AAA1267318	Mix I 储液
100 µm 滤膜	Fisher	07-201-432
BD Intramedic 聚乙烯导管	Fisher	427410	鼻腔灌洗用导管
BD 一次性带鲁尔锁头端注射器（1 mL）	Fisher	14-823-30
D39	国家典型培养物保藏中心（NCTC）	NCTC 7466	肺炎链球菌菌株
Pivetal 异氟烷	Patterson Veterinary	07-893-8440	感染期间麻醉用异氟烷
Thermo Scientific 含庆大霉素的血琼脂培养基	Fisher	R01227	含抗生素庆大霉素的血琼脂平板
TIGR4	ATCC	BAA-334	肺炎链球菌菌株