一个小鼠模型，用于研究病毒共感染后肺炎 链 球菌的致病性转变

摘要

来源： Lenhard， A. 等人。 一个小鼠模型用于描述肺炎 链 球菌在病毒共感染后从定殖者转变为病原体的过程，重现了年龄加重的疾病。 J. Vis. Exp. （2022年）

本视频展示了一种小鼠共感染模型，其中流感病毒触发 肺炎链 球菌从定殖者转变为病原体。它概述了细菌定殖、病毒感染和疾病进展的各个步骤。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会审查。

1. 对小鼠进行鼻腔内接种生物膜培养的肺炎链球菌（S. pneumoniae）

1. 购买鼠标，在你想要的年龄使用。
   注意： 3-4个月大的小鼠被优先用于模拟年轻宿主，21-24个月的小鼠可用于模拟65岁的老年个体>。这里展示的数据来自C57BL/6雄性小鼠。
2. 将生物膜培养的细菌分液在冰上解冻，并以1700克×旋转5分钟。 小心取出并丢弃上清液，避免破坏沉淀，将沉淀重新悬浮于1毫升含磷缓冲盐水（PBS）中清洗细菌，然后在1700×克下再次旋转5分钟。去除上清液，将沉淀液重新悬浮到达到所需浓度的容量（鼻腔注射目标为5 × 10 6个^集落形成单位（CFU）/10微升）。通过将准备好的接种物镀在血液琼脂平板上，确认细菌的含量。
3. 通过将稀释的5微升接种液移液到每个鼻腔内，向小鼠注射5×10^{6 CFU} 。确保牢牢握住小鼠，稳定头部，直到吸入体积（通常在将体积移液器移入鼻孔后几秒内）。在无麻醉的情况下进行此步骤，以防止接种物被肺吸入。

2. 流感甲型病毒（IAV）病毒感染

1. 在鼻腔接种肺炎 链球菌48小时后，冰上解冻感兴趣的IAV菌株。
   注意： 本研究数据来自 通过协作交换 获得的一种小鼠适应型甲型流感病毒A/PR/8/34 H1N1。
2. 病毒解冻后，将病毒稀释至PBS浓度;气管内感染目标为20个斑块形成单位（PFU）/50微升，鼻腔感染需200个PFU/10微升。对于模拟感染和仅细菌的组，使用PBS接种小鼠。
3. 麻醉前在小鼠眼睛涂抹眼用润滑剂。用5%异氟醚麻醉小鼠，并用力夹脚趾确认麻醉。
4. 麻醉后，将其从异氟醚腔中取出，立即用50微升（20 PFU）IAV气管内用钝镊子将舌头抽出，并将液体移入气管。
5. 将小鼠单独关在笼子中观察，直到完全康复（它们能够保持胸骨卧姿（能直立趴在胸前）。
6. 恢复后，立即使用步骤1.3的接种方法，向小鼠注射10微升（200 PFU）IAV。
7. 经历过单次或双重细菌和病毒感染的家鼠，但属于同一感染组，且与其他组别分离。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
4-氨基苯甲酸	费舍尔	AAA1267318	Mix I 库存
100微米滤波器	费舍尔	07-201-432
BD 医务用聚乙烯管	费舍尔	427410	鼻洗管
BD一次性注射器，配备Luer-Lok注射器（1毫升）	费舍尔	14-823-30
D39	国家模式培养收藏（NCTC）	NCTC 7466	肺炎链球菌株
雌性植物异氟醚	帕特森兽医	07-893-8440	异氟醚用于感染期间的麻醉
Thermo Scientific 血琼加庆大霉	费舍尔	R01227	含有抗生素庆大霉素的血液琼脂平板
TIGR4	空军交通管制委员会	BAA-334	肺炎链球菌株