小鼠共感染模型中细菌计数中感染组织处理

摘要

来源： Lenhard， A. 等人。 一个小鼠模型用于描述肺炎 链 球菌在病毒共感染后从定殖者转变为病原体的过程，重现了年龄加重的疾病。 J. Vis. Exp. （2022年）

本视频展示了一只同时感染致病细菌和病毒的小鼠肺部的处理过程。对肺组织进行剁碎、均质和装甲可以量化细菌负荷，从而显示细菌扩散到肺部的情况及疾病严重程度。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会审查。

1. 感染组织的处理以进行细菌计数

1. 肺部采集
   1. 用解剖剪刀在裸露的肋骨两侧切开，轻轻将肋骨拉向老鼠头部，露出心脏。将一根25克针头插入一根10毫升注射器，注射器预注含磷酸盐缓冲盐水（PBS），开始缓慢灌注。观察肺部漂白情况，作为灌注成功的指标。冲洗时要慢慢冲洗，以避免破坏肺组织。
   2. 用镊子抬起心脏，切开一口，将肺和心脏分开。分离后，用镊子取出肺部所有叶，并用无菌PBS冲洗器冲洗，去除残留血液。在培养皿中，将肺切成小块搅拌均匀。取出半个肺混合液以确定细菌菌落形成单元（CFU）或病毒斑块形成单元（PFU），并将其置于一个圆底15毫升管内，预装0.5毫升PBS进行均质化。
      注意： 不同的评估中，不要同时取同肺的不同叶。相反，所有叶片应被剁碎，充分混合，并均匀分组以供不同评估。
2. 要均匀化收集的组织，首先将均质探针放入70%乙醇中，并以60%功率启动均质器30秒。在无菌水中重复这一步骤10秒。将每组组织均质化1分钟。在每个样品之间用无菌水中清洗均质探针，并在每个器官和样本组之间放入70%乙醇的新管中清洗。
3. 细菌数的枚举
   1. 所有器官均被采集并均质化后，在血琼脂平板上连续稀释。计算总CFU时，使用10微升进行电镀，并记录每个样品的最终体积（毫升单位）。在37°C/5%_CO2温度下孵育一夜。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
BD一次性注射器，配备Luer-Lok尖端（1毫升）	费舍尔	14-823-30
渔夫布兰德精细解剖剪刀	费舍尔	08-951-5	用于收割的仪器
Fisherbrand 解剖组织钳	费舍尔	13-812-38	摘取用镊子
Fisherbrand 一次性无菌注射器（10 mL）	费舍尔	14-955-459