建立阴道B族链球菌小鼠模型 链球菌 感染

摘要

来源： 帕特拉斯，K. A.，多兰，K. S. 一种B族链球菌感染的小鼠模型 链球菌 阴道定植 视频实验杂志 (2016)

本视频展示了经激素处理的雌性小鼠的准备及其阴道接种B族链球菌的过程 链球菌 用于模拟感染。本文详细说明了如何培养和制备细菌，将接种物注入阴道腔，以及确保感染成功的方法。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. B族链球菌阴道接种 链球菌 （GBS）

1. 接种前一天，在37 °C条件下，于Todd Hewitt肉汤（THB）中培养5 ml目标GBS菌株（如A909（Ia血清型））的过夜液体培养物。
2. 将GBS过夜培养物按1:10体积比转接到新鲜THB中，于37 °C继续培养。使细菌生长至对数中期（OD₆₀₀ = 0.4–0.5）。

注意：根据GBS菌株的不同，此步骤通常需要2 - 3小时。

3. 将菌种转接到无菌的15 ml圆锥形离心管中，在3,000 × g条件下离心5分钟以收集菌体。吸除上清液。用200 µl无菌磷酸盐缓冲液（PBS）重悬菌体沉淀。
4. 取重悬后的菌液，在新的5 ml培养管中，加入3–5 ml PBS（每10只小鼠使用1 ml），调节菌液浓度至OD₆₀₀ = 0.4。此时菌液浓度约为1 × 10⁸菌落形成单位（CFU）/ml。将菌液转移至新的15 ml圆锥形离心管中，在3,000 × g条件下离心5分钟，重新收集菌体。吸除上清液。
5. 用PBS将菌体沉淀重悬至原体积的1/10。例如，若之前离心的OD₆₀₀ = 0.4菌液体积为3 ml，则用300 µl PBS重悬。

注意：此为用于动物接种的最终细菌悬液（~ 1 × 10⁹ CFU/ml）。

6. 保留50 µl该悬液用于系列稀释，并接种于THB琼脂平板，以确定确切的接种量。
7. 每只小鼠接种10 µl最终细菌悬液，使每只小鼠接受1 × 10⁷ CFU。
   1. 接种时，用手固定小鼠，将操作者拇指和食指捏住小鼠颈背部松弛皮肤以固定头部，同时固定尾巴使其无法移动。
   2. 用200 µl加样枪头吸取10 µl GBS菌液，将枪头插入阴道腔5至10 mm深处，缓慢释放10 µl接种物。
      注意：为尽量减少器官创伤或损伤风险（特别是在较年轻或体型较小的小鼠中），建议使用加样枪头而非标准200 µl枪头。
   3. 接种后立即松开颈部皮肤，抬起小鼠后肢，抓住尾巴使前肢在硬质表面上行走约1分钟。
   4. 肉眼观察阴道口是否有接种物流出。若发现回流，可使用新的枪头调整或扩大阴道口，促进回流物重新进入腔内；此外，也可用移液器吸取回流液体后重新接种。
      注意：如需给予局部药物、益生菌或目标蛋白，可在生理缓冲液中配制不超过20 µl的体积注入阴道腔。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
200 μl 凝胶加样移液器吸头	USA Scientific	1252-0610
Todd Hewitt 肉汤	Hardy Diagnostics	7161C
1×杜尔贝科氏磷酸盐缓冲盐溶液	Corning	21-031-CV