利用聚合酶链式反应检测二元培养中的糖类细菌

摘要

来源： Collins， A. J. 等， 《从口腔建立共生糖菌的稳定二元培养》。 J. Vis. Exp. （2021）

本视频演示了利用聚合酶链式反应（PCR）在放 线菌 二元培养中检测糖类细菌的过程。该方案概述了DNA扩增和凝胶电泳，以确认宿主与寄生虫的稳定相互作用。

方案

1. 通过PCR确认糖类细菌感染
   1. 经过5次传代后，通过聚合酶链式反应（PCR）确认感染。五段通道将确保任何非生长的糖类细菌细胞已通过25周期的PCR检测到极限。
   2. 准备PCR主混合液。建议配方如下：每根管子准备12.5 μL 2x PCR缓冲液，0.75 μL 10 μM 正向引子（580F¹² - AYT GGG CGT AAA GAG TTG C），0.75 μL 10 μM 反向引物（1177R¹³- GAC CTG ACA TCC CCT CCT TC），1 ΜL 25 MM MgCl_2，以及9 微升水。通过涡旋混合。
   3. 将24微升主混合液放入0.2毫升PCR管中。在PCR反应中加入1微升糖类细菌感染的培养物。将管子放入热循环器，执行以下作：初始变性在95°C下5分钟，95°C循环25次30秒，60°C循环30秒，72°C循环30秒，最终延长温度在72°C持续2分钟，最后保持在4°C。
   4. 装载并用1%琼脂糖凝胶运行PCR产物。约600碱基的带状区域表示糖细菌的存在。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂糖	费舍尔科学	BP160-100
脑心输液汤（脱水粉）	贝克顿-迪金森	211059	或其他适合目标生物的培养基
电泳电源	生物辐射	1645052
电泳装置	生物辐射	1704467
GoTaq 绿色混音	普罗梅加	M7122
Mastercycler Pro 热循环器	埃彭多夫	950040025	或者用同等的热循环器来做PCR
MgCl₂溶液25mM	普罗梅加	A3513
分子生物学级水	费舍尔科学	BP2819100
P-1000微量移液器	吉尔森	F123601G
PCR管 0.2 mL	费舍尔科学	14-230-205
移液器尖端 - 1000 μL	费舍尔科学	02-717-166
SYBR 安全DNA凝胶染色	热飞世科学	S33102
三氧化锌大豆汤（脱水粉）	贝克顿-迪金森	211825	或其他适合目标生物的培养基