小鼠模型中的导管相关性尿路感染

摘要

来源：Conover, M. S., et al., J. 建立并表征小鼠模型中的尿路感染与导管相关性尿路感染。J. Vis. Exp. (2015)

本视频演示了在雌性小鼠中组装和植入经尿道导管的操作步骤，随后进行细菌接种，以建立导管相关性尿路感染模型，并研究生物膜介导的宿主-病原体相互作用。

方案

所有涉及动物模型的实验步骤均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 导管相关性尿路感染（CAUTI）模型方案，CAUTI 模型导管针头制备

1. 取下30 G针头的帽。剪取一段7 mm的PE10（聚乙烯10）导管和一段5 mm的硅胶导管（如RenaSIL）。将PE10导管穿入针头，直至导管接触针头基部。
2. 然后将5 mm硅胶导管套入已装有PE10导管的针头。将针头组件在紫外（UV）光下灭菌过夜。
   注意：安装硅胶导管时，应使其超出针尖约1 mm。

2. E. faecalis OG1RF 细菌接种物的制备

1. 在接种日前48小时开始准备OG1RF菌种。从冻存菌种中划线接种OG1RF至BHI（脑心浸出液）琼脂平板上。
2. 挑取单个菌落，接种于10 ml BHI培养基中，37 °C静置培养18小时。离心培养物，并用1 ml无菌1×PBS洗涤菌体沉淀（共洗涤3次）。
3. 将细菌沉淀重悬于1×PBS（磷酸盐缓冲液）中。测定细菌的光密度，并调整浓度至所需接种量。常用的接种浓度为10⁷；但可根据实验设计进行调整。

3. 导管植入

1. 用70%乙醇清洁工作台，并在台面上铺上吸水垫（或使用无菌通风橱）。
2. 将导管针连接至一支1 ml（TB或结核菌素）空注射器。剪下一寸见方的Parafilm膜，在其表面涂上一小滴外科润滑剂（约硬币大小）。
   注意： 使用两种不同的针头分别进行导管置入和接种物注入，以尽量减少因导管植入所需机械操作而导致的意外接种。这种方法还便于减少所需准备的接种针数量。
3. 将C57BL/6小鼠置于一个32盎司的玻璃罐中，罐内放置一个装有浸透3 ml异氟烷的棉球的茶包球，或使用麻醉机蒸气室（按照制造商的说明书操作），直至小鼠失去意识但仍保持正常呼吸（每秒1次呼吸）。
4. 然后将小鼠仰卧于纸巾上并展开其四肢。用鼻罩或装有含少量异氟烷（约1-2 ml）棉球的50 ml锥形管覆盖小鼠鼻部。
   警告： 异氟烷是一种吸入性麻醉剂。应在通风良好的区域使用，并尽量减少研究人员的吸入。
5. 轻轻按压膀胱以诱导排尿，并确保膀胱排空。用100%乙醇擦拭巾擦拭尿道周围区域。
6. 用棉签蘸取10%聚维酮碘溶液，对尿道周围区域进行消毒。将接种针/注射器针尖朝下轻蘸外科润滑剂。
   注意： 聚维酮碘用于导管植入，其为一种比酒精更强效的无菌溶液。导管植入需要更多的机械操作以插入导管，因此具有更高的污染风险。
7. 将导管插入尿道口。插入后，使用镊子将（7 mm PE10）长段向膀胱方向推进，从而推动（5 mm 硅胶）短导管，将其置入膀胱内。立即取出针头，此时7 mm导管仍附着于针头上。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
导管和针头制备材料：
30 G 针头	BD Precision Glide	305106	30 G x ½ (0.3 mm x 13 mm)
PE10 聚乙烯导管	BD	427400	内径 -0.011 英寸 (0.28 mm)；外径 – 0.024 英寸 (0.61 mm)
RenaSIL 025 铂固化硅胶导管	Braintree Scientific, Inc	SIL 025	内径 0.012 英寸 × 外径 0.025 英寸，25 英尺盘装
感染实验材料：
异氟烷 – Isothesia	Butler Schein	29405	250 ml
透明直壁玻璃罐	Kimble Chase	5413289V 21
不锈钢茶叶过滤器	Schefs-Amazon		Schefs 品牌优质大容量不锈钢散装茶叶过滤器
非无菌棉球	Fisherbrand	22-456-880
50 ml Falcon 管	VWR	89039-660
Isotec 3 - 蒸发器	Ohmeda	1224478
耳标打孔器	Fisher Scientific	13-812-201	（必要时使用）
聚维酮碘溶液	Betadine solution		10% 聚维酮碘外用溶液
棉签	Fisher Scientific	22-037-924	6 英寸
实验台用垫巾	Fisherbrand	14206 63	吸水垫（20 英寸 × 36 英寸垫子）
外科润滑剂	Surgilube	0281-0205-36
解剖剪	Fine Science tools, INC	14084-08
微型 Adson 镊子	Fine Science tools, INC	11018-12
1 ml 注射器	BD	309659	结核菌素滑动接头
Parafilm 封口膜	Bemis	PM996	4 英寸 × 125 英尺
Eppendorf 管架	Fisherbrand	05-541-1
Eppendorf 管	MIDSCI	AVX-T-17-C
导管、膀胱和肾脏采集材料：
匀浆器	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
5 ml 聚丙烯圆底管	BD	352063	用于器官匀浆
纸巾	Georgia-Pacific
乙醇	Pharmco-AAPER	11100020S	200 证明
Costar™ 透明聚苯乙烯 96 孔板	Corning	3788
1× 磷酸钠盐缓冲液	Sigma-Aldrich	P3813
BRANSONIC 超声波清洗机 1210	Branson Ultrasonics Corporation	1210