建立伴有致病菌感染的小鼠烧伤模型

摘要

来源： Wang, Y., 等. 在体 内 多重耐药菌的抗菌蓝光治疗研究 鲍曼不动杆菌 利用生物发光成像技术研究烧伤感染 J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了如何通过应用加热的黄铜块并随后接种致病性细菌，在小鼠模型中建立烧伤感染。细菌会定植于暴露的细胞外基质并形成生物膜，从而实现对宿主-病原体相互作用的体内研究。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 由生物发光菌引起的烧伤感染小鼠模型 不动杆菌 baumannii

1. 使用7-8周龄、体重17-19 g的成年雌性BALB/c小鼠。实验开始前，让小鼠在实验室条件下适应至少3天。将小鼠饲养在12小时光照/12小时黑暗循环环境中，室温保持在21 ℃，并自由供应食物和水 随意摄取.
2. 通过腹腔注射氯胺酮-赛拉嗪混合物（100 mg/kg-20 mg/kg）对小鼠进行麻醉。用棉签轻轻触碰每只小鼠的眼睑；若眼睑反射消失，提示麻醉深度适当。用兽用眼膏覆盖小鼠眼睛，以防止麻醉期间眼睛干涩。
3. 使用50号刀头的毛发推剪剃除小鼠背部毛发，尽可能暴露更多皮肤。
4. 将35 mm培养皿的皿盖置于每只小鼠腹部下方，以保持其背部相对水平。
5. 在250 mL烧杯（装至80%满）中使用10" x 10"、220伏交流电（VAC）加热板加热水。将一块横截面为1 cm x 1 cm的黄铜块浸入烧杯中，直至其与水达到热平衡。热平衡通常需要 <5 分钟，以烧杯中的水重新沸腾为标志。
6. 在造成烧伤损伤之前，给予预先镇痛药物（皮下注射0.1 mg/kg的丁丙诺啡）以缓解疼痛。
7. 在给予镇痛药10分钟后，将加热的黄铜块轻轻按压在小鼠背部剃毛区域7秒，以诱导烧伤创面。 
   注意： 为避免操作人员遭受热损伤，在进行燃烧操作时应佩戴耐热手套。
8. 通过皮下注射0.5 mL无菌生理盐水以防止脱水。
9. 在造成热损伤5分钟后，使用移液器将50 µL含有5 × 10⁶菌落形成单位（CFU）的磷酸盐缓冲液（PBS）细菌悬液接种至小鼠烧伤部位。随后，用无菌棉签在皮肤上以Z字形涂抹，使菌液均匀分布于烧伤区域。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
小鼠	Charles River Laboratories, Wilmington, MA	BALB/c	7–8 周龄，体重 17–19 g
Acinetobacter baumannii	Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TX	临床分离株	基因工程发光菌株
胰岛素注射器	Fisher Scientific	14-826-79	BD Lo-Dose U-100 胰岛素注射器，用于注射
氯化钠	Fisher Scientific	721016	0.9% 氯化钠
磷酸盐缓冲液，1× 溶液	Fisher Scientific	BP24384	多种生物分子实验中常用的标准磷酸盐缓冲液
接种环	Fisher Scientific	22-363-605	用于将细菌接种物涂抹于小鼠烧伤表面
黄铜块	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm × 10 mm	用于在小鼠身上制造烧伤
Extreme Dragon PBI/Kevlar 耐高温手套	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	耐热手套
Greiner 培养皿	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm × 10 mm
Corning 数字加热板	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10 英寸 × 10 英寸，220 VAC，用于加热水
小鼠/大鼠细线式水加热手术台	E-Z Systems	EZ-211	防止手术过程中热量散失和低体温
兽用软膏	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	眼科软膏，用于防止眼睛干涩