小鼠烧伤伤口感染Acinetobacter baumannii的生物发光成像

摘要

来源：Wang, Y., 等. 利用生物发光成像技术对耐多药Acinetobacter baumannii烧伤感染进行蓝光抗菌治疗的体内研究。J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了对感染携带生物发光操纵子的Acinetobacter baumannii小鼠的烧伤伤口进行成像的操作流程。该方法通过荧光素酶催化底物氧化产生与细菌载量成正比的光信号，从而利用生物发光成像系统实现对感染进展的实时监测。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 小鼠感染的生物发光成像

1. 使用包含增强型电荷耦合器件相机、相机控制器、样品室和图像处理器的低光照成像系统对小鼠进行成像。
2. 通过腹腔注射氯胺酮-赛拉嗪混合物（100 mg/kg - 20 mg/kg）对小鼠实施麻醉。用棉签轻轻触碰小鼠眼睑；若未观察到眼睑反射，则提示麻醉深度适当。
3. 启动活体成像软件。在出现的控制面板中，点击“初始化”。等待“温度”框颜色变为绿色，表明样品室载物台温度已达到 37 °C。
4. 将小鼠放置于成像系统的样品室载物台（37 °C）上，使感染的烧伤部位正对相机下方。
   注意：当烧伤部位变干时，细菌的生物发光可能减弱。因此，建议在成像前用 PBS 润湿小鼠的烧伤部位。
5. 在控制面板中，勾选“发光”选项。选择“自动曝光”，以便活体成像软件根据生物发光强度自动优化成像曝光时间。
6. 从“视野”下拉列表中选择“C”。选择“扫描中等范围”选项，使软件自动确定焦距。勾选“叠加”选项。
7. 点击“采集”以获取图像。在“编辑图像标签”对话框中点击“确定”；此时将出现“图像窗口”和“调色板”。
8. 设置自动 ROI 参数以实现自动选择。
9. 以相对发光单位（RLUs）量化生物发光强度，并以伪彩标度显示生物发光，颜色从粉红色（最强）到蓝色（最弱）变化。
10. ....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Series III	临床前活体成像
发光二极管（LED）	VieLight Inc, Toronto, Canada	415 nm	照明光源
小鼠	Charles River Laboratories, Wilmington, MA	BALB/c	7–8 周龄，体重 17–19 g
Acinetobacter baumannii	Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TX	临床分离株	基因工程发光菌株
Greiner 培养皿	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm × 10 mm