蓝光治疗小鼠烧伤伤口耐药性细菌感染

摘要

来源：Wang, Y., et al. 利用生物发光成像技术对耐多药Acinetobacter baumannii烧伤感染进行抗菌蓝光治疗的体内研究。J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了使用蓝光疗法治疗小鼠由生物发光的耐药细菌引起的烧伤伤口感染的操作步骤，随后通过生物发光成像监测治疗效果。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 蓝光抗菌疗法治疗小鼠 A. baumannii 感染

1. 通过腹腔注射氯胺酮-赛拉嗪混合物（100 mg/kg - 20 mg/kg）对小鼠进行麻醉。若眨眼反射消失，提示麻醉深度适当。
2. 将小鼠随机分为抗菌蓝光（aBL）处理组（n = 10）和未处理对照组（n = 10）。
3. 对于抗菌蓝光（aBL）处理组，使用铝箔覆盖小鼠眼睛，以避免光线过度暴露。将小鼠烧伤部位直接置于发光二极管（LED）下方，并在小鼠腹部下方放置一个35 mm培养皿的盖子，以保持其背部水平。
4. 将步骤3.5中提到的功率/能量计替换为放置在方形培养皿上的小鼠。调整小鼠的高度，使其烧伤表面与LED出光口之间的距离，等于此前功率/能量计的光传感器表面与LED出光口之间的距离。
5. 以100 mW/cm²的辐照度照射感染的烧伤部位。每次给予72 J/cm²的aBL剂量，直至累计剂量达到360 J/cm²（例如，0、72、144、216、288 和 360 J/cm²）。每次光照剂量后，对小鼠进行生物发光成像。
6. 对于未处理对照组，采用与aBL处理组相同的时间间隔，对小鼠烧伤部位进行生物发光成像。
7. 在小鼠恢复前，将其置于加热水浴手术台上，以防止热量散失和低体温。持续观察小鼠的活动状态和眨眼反射，直至其恢复意识。小鼠恢复后，每笼饲养2–3只。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Series III	临床前活体成像
发光二极管（LED）	VieLight Inc, Toronto, Canada	415 nm	照明光源
功率/能量计	Thorlabs, Inc., Newton, NJ	PM100D	光辐照度检测器
小鼠	Charles River Laboratories, Wilmington, MA	BALB/c	7–8 周龄，体重 17–19 g
Acinetobacter baumannii	Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TX	临床分离株	基因工程发光菌株
1×磷酸盐缓冲液（PBS）	Fisher Scientific	BP24384	多种生物分子实验中常用的标准磷酸盐缓冲液
Fisher Scientific Redi-Tip 吸头，1–200 µL	Fisher Scientific	02-707-502	移液器吸头
黄铜块	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm × 10 mm	用于在小鼠身上制造烧伤
Extreme Dragon PBI/Kevlar 耐高温手套	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	耐热手套
Greiner 培养皿	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm × 10 mm
Corning 数字加热板	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10 英寸 × 10 英寸，220 VAC，用于加热水
小鼠/大鼠细线式水循环加热手术台	E-Z Systems	EZ-211	防止手术过程中热量流失和低体温
兽用软膏	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	眼科软膏，用于防止眼睛干涩