通过尾静脉注射后定量小鼠心脏中的细菌载量 单核细胞增生李斯特菌

摘要

来源： McMullen, P. D., Freitag, N. E. 利用培养的心脏细胞评估细菌侵袭及感染小鼠心脏定植 单核细胞增生李斯特菌. 视频实验杂志 (2015)

本视频演示了将单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）注入小鼠尾静脉以建立全身性感染的操作。视频展示了细菌在体内的循环过程、器官定植情况，以及通过组织匀浆、系列稀释和菌落计数来定量心脏中细菌载量的方法。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 接种 单核细胞增生李斯特菌 通过尾静脉注射将细菌注入小鼠体内并评估肝脏、脾脏和心脏中的细菌载量

注意：所有动物实验均按照美国疾病控制与预防中心生物安全二级指南进行。小鼠通常需提前一周订购，每笼饲养5只。小鼠在注射前需在新实验室环境中适应四天。本实验使用6至8周龄的雌性Swiss-Webster小鼠，每笼5只，饲养于屏障环境中，并给予非限制性饮食。

1. 每次准备一笼小鼠，取下笼盖及食物/饮水盒，将笼子置于加热灯下五分钟。此过程可使尾静脉扩张，便于进行注射。
2. 取出一只动物，将其放入固定装置（或剪去末端的离心管）中，以在注射过程中限制其活动。
3. 使用酒精棉片清洁注射部位，并等待酒精挥发。这不仅能清洁局部区域，还可进一步扩张尾部静脉。
4. 使用带有27.5号针头的1 ml注射器，将200 μl所需培养物经尾静脉缓慢注射入小鼠体内。
5. 使用纱布按压以止住注射可能引起的出血，并将动物放入清洁的笼具中。
6. 对剩余的动物和品系重复此过程。务必在每个动物笼子上标注其所对应的品系。
7. 每天检查动物，移除并处死任何出现病征的个体。若无动物表现出病症，则让感染持续72小时后处死全部动物。
8. 为处死动物，使用 CO_2....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Difco	琼脂	214510	2 kg 颗粒状琼脂
In vitrogen	LB 液体培养基基础	12975-084	2 kg LB 肉汤基础粉末（不含琼脂）
Falcon	96 孔圆底板	35-3077	非组织培养处理的 96 孔板