评估抑制剂对枯萎芽孢杆菌膜形成的影响

摘要

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本视频演示了利用 枯叶芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）进行膜膜形成检测，评估破坏基质合成和生物膜形成的小分子抑制剂，为筛选选择性抑制表面相关生长而不影响游离细胞的化合物提供了模型。

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1. 评估小分子抑制剂对胶膜和生物膜菌落形成的影响

准备2倍定义生物膜诱导的MSgg（谷氨酸甘油）培养基，不含氯化钙和六水合铁（III）氯化物。过滤灭菌后，加入氯化钙。介质可直接使用，或在黑暗中储存至4°C。
实验当天准备1xMSgg稀释液。
1. 将2xMSgg培养基稀释为1x，使用无菌蒸馏水（胶膜）或无菌3%高温（80°C）琼脂（生物膜），并加入六水化铁（III）至最终浓度为50 μM（菌膜）或250 μM（生物膜）。将抗生素或小分子抑制剂加入所需浓度，并充分混合。例如，要在30毫升中获得0.5 mM的D-白氨酸最终浓度以建立胶膜或生物膜，需加入196.6微升76.3 mM（10 mg/ml）D-亮氨酸库存溶液。
  注意： 最终的1倍MSgg组合详见表1。与原始配方相比，培养基含有50 μg/ml的苏氨酸，且用于在固体MSgg培养基上生长生物膜菌落的铁浓度提高了2.5倍，以优化皱缩菌落形态。
琼脂凝固后，将固体MSgg板在生物罩中晾干30-45分钟后再接种。
为了选择干扰剥膜形成机制的特定抑制剂（见图1），应排除所用浓度影响浮游和静态生长的因素。
1. 通过每小时测量600纳米的光学密度，直到稳定生长阶段，确定简单的生长曲线....

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图1。 概念概述，用于识别一个稳健的实验装置，以评估生物膜形成的特异性抑制效果。选择标准：能够指示特定干扰生物膜形成但对浮游生物生长无显著影响的小分子抑制剂。

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