一种用于体外细菌生物膜形成的带腔室盖玻片方法

摘要

来源：Beaudoin, T., et al. 利用带腔载玻片模型可视化痰液对生物膜发育的影响. J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了利用带腔盖玻片研究囊性纤维化患者来源的痰液宿主因子对细菌生物膜形成影响的方法。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 用于生物膜形成的多室盖玻片法
   1. 在所需培养基中，于37 °C、200 rpm振荡条件下过夜培养目标细菌分离株。
      注意： 使用了多种不同的细菌，包括临床分离株 铜绿假单胞菌, 金黄色葡萄球菌, 洋葱伯克霍尔德菌 复杂且 Achromobacter xylosoxidans 培养基的选择取决于所研究的菌株和条件，但初始实验可使用LB培养基（Luria broth）。
   2. 从过夜培养物中取40 μl接种于4 ml新鲜培养基中，37 °C、200 RPM振荡培养3-4小时，至600 nm处光密度（OD600）约为0.5-0.6。
   3. 将步骤1.2中的培养物用含10%痰滤液或不含痰滤液（作为对照）的所需培养基稀释至1/5。可测试其他浓度的痰滤液（即， 50% 或 100%
   4. 使用200 μl稀释液接种至腔室载玻片的孔中。
   5. 在37 °C条件下静置培养4小时，使细菌贴壁。
   6. 孵育4小时后，移除培养基，用1×新鲜培养基轻轻冲洗生物膜，随后加入200 μl新鲜培养基。
      注意： 为研究痰液对生物膜的影响，新鲜培养基中应含有痰液上清液。
   7. 在37 °C下静置培养生物膜，根据....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Lab-Tek II 培养皿盖玻片，#1.5 硼硅酸盐，8 孔	Thermo Fisher Scientific	155409
Miller's LB 培养基	Thermo Fisher Scientific	12780-052	用于过夜培养/生物膜生长的标准培养基