囊性纤维化患者痰液滤液诱导的细菌生物膜共聚焦成像

摘要

来源：Beaudoin, T., et al. 利用带腔载玻片模型可视化痰液对生物膜形成的影响。 J. Vis. Exp. (2016)

本视频演示了一种 体外 评估患者来源的囊性纤维化痰液对细菌生物膜形成影响的方法。利用载玻片培养室、荧光染色和共聚焦显微镜技术，该方法可揭示在痰液存在条件下形成的生物膜具有厚度增加、结构改变以及活体生物量更高的特征，凸显了宿主成分在调控生物膜发育过程中的作用。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

生物膜染色与共聚焦显微镜观察

1. 在理想的生长时间后（24–48 小时效果最佳），从培养室孔中移除培养基，并用 300 μl 无菌 PBS 轻柔地清洗每个培养室两次。
2. 通过将每毫升所需溶液加入 1 µl 的每种染料（来自活性检测试剂盒）来配制用于生物膜的染色混合液。将染料溶于水或培养基溶液中。

注意：制造商建议使用水。

3. 向玻璃培养小室的每个孔中加入 200 µl 染料混合液，在室温下避光孵育 45 分钟。
4. 从培养小室中移除染色液，用 300 μl 无菌 PBS 清洗每个孔。移除 PBS 并替换为新鲜的水或培养基。
5. 通过共聚焦显微镜观察生物膜的形成情况。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Lab-Tek II 培养皿盖玻片，#1.5 硼硅酸盐，8 孔	Thermo Sicher Scientific	155409
Filmtracer Live/Dead 生物膜活力检测试剂盒	Thermo Fisher Scientific	L10316
Miller's LB 培养基	Thermo Fisher Scientific	12780-052	用于过夜培养/生物膜生长的标准培养基
磷酸盐缓冲液（Dulbecco A）	Oxoid	BR0014G	更换培养基后用于清洗生物膜培养腔
Zeiss AxioVert 200M	Carl Zeiss