利用GFP标记的SKN-1可视化秀 丽隐杆线虫 病原体诱发的氧化应激

Abstract

资料来源：Naji， A. 等人。研究秀丽隐杆线虫中由Mitis群链球菌引起的氧化应激。J. Vis. Exp.（2019）

本视频演示了在秀丽隐杆线虫中使用绿色荧光蛋白标记的SKN-1，通过追踪绿色荧光来监测氧化应激。暴露于 S. gordonii 的线虫表现出强烈的核荧光，证实病原体诱导的胁迫，而喂食大 肠杆 菌的线虫细胞质中显示弥漫绿色荧光，表明SKN-1激活极小。

Protocol

1. 观察SKN-1在感染 戈尔多尼链球菌感染中的定位

1. 在每个播种 链球菌 的Todd–Hewitt酵母提取物（THY）和每个播种大 肠杆 菌（E. coli）的线虫培养基（NGM）琼脂平板中加入~100个L4幼虫。每种菌株使用三块培养皿。在25°C下孵育2至3小时。
2. 随后，将培养箱中的平板取出，用改良的M9缓冲液（M9W）清洗，并将线虫收集到15毫升锥形管中。
3. 把蚯蚓洗三次。
4. 通过抽吸去除大部分M9W，并向蚯蚓颗粒中加入含2 mM叠氮化钠或2 mM盐酸四米索尔的500微升M9W。这将使蠕虫被麻醉，确保显微镜下成像时不会出现任何运动。
   注意：处理叠氮化钠时请佩戴个人防护装备（PPE）。在化学罩下准备叠氮化物溶液。
5. 将蚯蚓颗粒在室温（RT）下孵育15分钟。然后，将15微升的蚯蚓悬浮液滴在预备好的琼脂糖垫上。轻轻将1.5号盖片覆盖装有麻醉虫的琼脂棉垫。
6. 利用荧光显微镜，利用荧光素异硫氰酸酯（FITC）和4′，6-二蜧二代-苯咚咚（DAPI）滤镜，观察Skinhead家族转录因子1或SKN-1：GFP（绿色荧光蛋白标记SKN-1）的定位。图像蠕虫在10倍和20倍放大时出现。
7. 根据S....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
介质与化学品
BD 巴克托·托德·休伊特汤	费舍尔科学	DF0492-17-6
15 mL锥形无菌聚丙烯离心管	费舍尔科学	12-565-269
叠氮化钠	西格玛·奥尔德里奇	S2002-25G
盐酸四米索尔	西格玛·奥尔德里奇	L9756
No.1.5 18毫米 x 18毫米封面滑套	费舍尔科学	12-541A
琼脂糖	西格玛·奥尔德里奇	A9539-50G
LD002	IdIs1	SKN-1B/C：：GFP + ROL-6（SU1006）	基思·布莱克韦尔