建立小鼠模型 艰难梭菌 感染

摘要

来源：Winston, J. A., et al. 利用头孢哌酮处理的小鼠模型研究临床相关性 Clostridium difficile 菌株 R20291。J. Vis. Exp. (2016)

本视频演示了用抗生素预处理小鼠后接种Clostridium difficile孢子以建立感染小鼠模型的实验步骤，用于研究其致病机制及宿主免疫应答。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 制备 艰难梭菌 孢子接种物与小鼠灌胃

注意：接种 C. difficile 芽孢的小鼠应饲养在生物安全二级动物实验设施中。

1. 获取 C. difficile 所需菌株（此处为 R20291）的孢子储备液，该储备液已用无菌水配制并保存于 4 °C。使用前需测定此孢子储备液的浓度。
2. 根据已知的孢子储备液浓度（孢子数/ml），计算所需稀释倍数，以获得每25 µl含10⁵个孢子的悬液。确保接种液体积足够用于实验中所有小鼠的接种（每只小鼠25 µl）、接种物浓度的计数（约30 µl）以及弥补移液误差。
3. 涡旋原始样本 C. difficile 孢子储备液。然后，重悬步骤1.2中计算出的原始储备液体积 C. difficile 将孢子储存液加入无菌水中，置于带螺旋盖的微量离心管内。在超净工作台中进行有氧操作。将此稀释后的混合液标记为“孢子接种物”。
4. 将孢子接种物放入65 °C水浴中加热20分钟。
   注意： 此步骤将确保仅有活化的 C. difficile 热处理后仍有孢子残留。
5. 在层流罩内，取50 µl加热后的孢....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
#62 Perisept 杀孢子消毒清洁剂	SSS Navigator	48027	该产品需按照制造商推荐进行稀释
C57BL/6J 小鼠	The Jackson Laboratory	664	小鼠年龄应为 5 - 8 周
2 ml 微型离心管螺口盖	Corning	430917