监测细菌定植 拟南芥 无土栽培系统中的根系

摘要

来源： Harris, S. L., 等监测细菌定植与维持 拟南芥 漂浮式水培系统中的根系 J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了一种用于监测在无土系统中生长的拟南芥（Arabidopsis thaliana）幼苗根部相关细菌定植的实验方案。细菌定植后，通过超声处理将其从根部脱离，随后进行梯度稀释、涂布平板并培养，以形成反映细菌附着能力与存活情况的菌落。

方案

用于活细胞计数的细菌收集

注意：可在任意孵育时间点测定每株幼苗根部的细菌数量。定植过程可在0小时至18小时之间进行监测，而维持状态则可从18小时开始持续监测。

1. 从网筛中取出幼苗 （图1，步骤5）。将经火焰灭菌的镊子轻轻置于叶片下方（但位于网筛的叶片一侧），轻夹茎部。轻轻晃动幼苗，使其根部脱离网筛而不折断。若根部断裂，可轻柔刮取网筛底部，以收集完整长度的根。
2. 去除植物根部的细菌。将细菌转移至含有1 mL ddH₂O的24孔板的孔中。对样品进行超声处理。
3. 定量根部的细菌。
   1. 将超声处理后的样品在细菌培养基中进行10倍系列稀释，直至10^-6稀释度。取每种稀释液50 µL分别接种于独立的琼脂平板上，并用无菌玻璃珠涂布均匀。将平板置于细菌最适生长温度下培养，直至可清晰计数单个菌落。

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结果

图1：细菌在A. thaliana根部定殖与维持的检测方法。A. thaliana幼苗在无菌塑料网片上生长后，转移至适合细菌生长的培养基（此处为0.1 x LB（Luria Broth）Lennox）中。植物漂浮于振荡液体中，细菌在根部定殖18小时。经洗涤后，将已定殖的漂浮体系转移至适合植物生长的培养基（0.5x.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
24孔板	BD Falcon	1801343
火焰灭菌器
镊子
培养箱			设定为指定细菌生长的最佳温度
无菌水
超声波破碎仪
24探头超声波破碎仪附件			用于同时超声处理多个样品，也可单独进行
玻璃珠
多通道移液器/重复移液器
无菌96孔板			用于系列稀释，可用离心管替代
拟南芥（Arabidopsis thaliana）种子			推荐从拟南芥生物资源中心获取种子资源
恶臭假单胞菌（Pseudomonas simiae）WCS417r