光漂白蓝细菌色素以成像生长调控蛋白

摘要

来源： 詹，Y. 等光漂白可实现对FtsZ环的超分辨率成像 原绿球藻（Prochlorococcus） 视频实验杂志 (2018).

本视频演示了在低温条件下使用氙灯对蓝细菌细胞中的色素进行光漂白的步骤，以改善对生长调控蛋白的荧光成像效果。

方案

1. 封闭步骤中叶绿素色素的光漂白

1. 将盖玻片转移至染色皿中，在盖玻片上加入50 µL封闭缓冲液，该缓冲液含有0.2%（v/v）非离子去垢剂Triton X-100和3%（v/v）山羊血清。
2. 将整个染色板置于冰上，并移至氙灯光源下进行至少60分钟的光漂白处理，光照强度为1,800 µmol 光子/m²·s。
3. 光漂白和封闭完成后，用纸巾边缘小心吸去封闭缓冲液。
   注意：氙灯的光强极高，需佩戴合适的太阳镜以保护眼睛。同时，应用铝箔包裹光源和染色板，防止光线泄漏造成眼部损伤。每15分钟检查一次盖玻片，确保其保持湿润；若出现干燥，应添加50 µL封闭缓冲液。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
聚苯乙烯微粒	Spherotech	PP-20-10	2.0–2.4 µm
盖玻片	Marienfeld	111580	18 mm ∅，厚度 No. 1
乙醇	Scharlau	ET00021000
聚-L-赖氨酸氢溴酸盐	Sigma-Aldrich	P9155	分子量 70,000–150,000
多聚甲醛	Sigma-Aldrich	158127
戊二醛溶液，50%	Sigma-Aldrich	340855
PBS	Sigma	P3813
吐温 X-100	Sigma	T8787
乙二胺四乙酸二钠盐，二水合物	Gold biotechnology	E-210-500
Trizma 碱	Sigma	T1503
溶菌酶	Sigma	L6876
山羊血清	Sigma	G9023
XD-300 氙灯光源			250 W