病原体感染的Drosophila 血细胞的高分辨率共聚焦成像

摘要

来源： Hiroyasu, A., 等. 血细胞的提取方法 黑腹果蝇 用于微生物感染与分析的幼虫 视频实验杂志 (2018)

本视频展示了利用高分辨率共聚焦成像技术对感染了贝氏柯克斯体（Coxiella burnetii）的黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）血细胞进行三维病原体定位观察，从而实现对细胞内感染动态及宿主-病原体相互作用的详细分析。

方案

1. 共聚焦成像
   1. 配置共聚焦显微镜以进行DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）、EGFP（增强型绿色荧光蛋白）和mCherry的三色成像。使用以下设置：DAPI激发（ex）405 nm，发射（em）415–480 nm；EGFP激发（ex）488 nm，发射（em）493–564 nm；mCherry激发（ex）587 nm，发射（em）597–700 nm。
   2. 将样品置于显微镜上，使用63X/1.4数值孔径（NA）物镜对样品进行聚焦。在视野中定位需要成像的血细胞。
   3. 调节激光功率和探测器增益，以获得适当的样品曝光。检查多个z平面，确保曝光水平适用于整个样品厚度。
   4. 找到完整血细胞在z轴上的顶部和底部位置，并将这两个位置设置为z轴切片的起始和终止位置。
   5. 仅使用扫描缩放功能对包含血细胞的区域进行成像。通常使用3X的缩放倍数。
   6. 以适当的分辨率采集图像序列，例如在x-y平面上为1024 × 1024像素，在z维度上为0.3 µm间距。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Coxiella burnetii - mCherry	Dr. Heinzen, R.
显微镜盖玻片	Fisher Scientific	12-545-80
4',6-二脒基-2-苯基吲哚	Thermo Fisher Scientific	62247
共聚焦显微镜	Leica	TCS SP8-X White Light Confocal Laser Scanning Microscope
显微镜载玻片	Fisher Scientific	12-552-3