利用生物发光成像追踪小鼠模型中的细菌感染与伤口愈合

摘要

来源：Hunt, A. M. A., 等. 走向光明的一侧：在糖尿病无毛小鼠模型中对慢性伤口内 Pseudomonas aeruginosa 生物膜感染进行活体监测。J. Vis. Exp.(2017)。

本视频演示了利用生物发光成像和显微成像技术评估糖尿病小鼠伤口感染清除情况及愈合进展过程的操作步骤。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 动物医学评审委员会审核。

1. 伤口测量与成像
   1. 每天评估动物的临床症状。
   2. 根据需要提供食物、水，并更换笼具。
   3. 每天检查敷料的完整性。当敷料存在时，由于遮挡伤口，仅能测量生物发光信号。在第8天移除敷料且不再更换，以便测量伤口闭合情况。
   4. 每隔一天称量一次动物体重。
   5. 在所有实验日，将小鼠单独放入配备HEPA过滤器的隔离室中，并使用in vivo成像系统每天或每隔一天进行一次成像，直至发光值降至背景水平以下。
   6. 第8天之后，诱导全身麻醉，并使用带摄像头的显微镜结合标尺每隔一天拍摄一次伤口的显微图像，直至伤口完全愈合。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Opsite	Smith & Nephew	型号 66000041	Smith & Nephew Flexfix Opsite 透明粘性敷料卷，4" × 11 码
SKH-1 小鼠 Crl:SKH1-Hrhr	Charles River Breeding Laboratories	SKH1	无毛小鼠，8 周龄
链脲佐菌素（STZ）	Sigma Aldrich	S0130-1G	链脲佐菌素粉末，1 g
AccuChek 血糖仪	Accu-Chek Roche	货号 05046025001	ACCU-CHEK CompactPlus 糖尿病监测护理套装
Pseudomonas aeruginosa Xen 41	Perkin Elmer	119229	生物发光型 Pseudomonas aeruginosa
杜尔贝科磷酸盐缓冲液（DPBS）	Sigma Aldrich	D8537	PBS
胰蛋白胨大豆琼脂	Sigma Aldrich	22091	培养琼脂
美洛昔康	Henry Schein Animal Health	49755	Eloxiject（美洛昔康）5 mg/mL，注射用溶液
10% 聚维酮碘（Betadine）	Purdue Products LP	301879-OA	涂抹棒，Betadine 溶液，消毒剂，单个包装，200 支/箱
用于制作夹板的硅胶	Invitrogen Life Technologies Corp	P-18178	Press-to-Seal 硅胶片，13 cm × 18 cm，厚 0.5 mm，5 片/套
HEPA 过滤器	Teleflex	28022	Gibeck ISO-Gard HEPA 过滤器，型号 28022
活检打孔器	VWR International Inc	21909-142	一次性活检打孔器，5 mm，无菌，50 个/包
活检打孔器	VWR International Inc	21909-140	一次性活检打孔器，4 mm，无菌，50 个/包
葡萄糖	J.T.Baker	1916-01	右旋糖酐，无水，粉末
Corning 96 孔黑色板	Fisher Scientific	07-200-567	96 孔透明底黑色聚苯乙烯微孔板
25 号 5/8 英寸针头	BD	305122	普通斜面针头