小鼠脂多糖诱导急性肺损伤用于外泌体与免疫分析

摘要

来源：Yuan, Z., et al. 脂多糖诱导的脓毒症肺损伤中的支气管肺泡灌洗外泌体。 J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了一种通过腹腔注射细菌脂多糖诱导和分析急性肺损伤（ALI）的小鼠体内模型。肺泡巨噬细胞和中性粒细胞引发的炎症级联反应导致上皮和内皮屏障破坏，使液体和免疫细胞在肺泡内积聚。随后通过气管灌洗在死后收集肺泡灌洗液，用于后续对免疫组分和外泌体的分析。

方案

1. 小鼠急性脓毒症肺损伤模型

1. 使用6-8周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠（体重20-22 g）建立动物模型，所有操作均采用无菌技术和无菌器械。将所有手术器械（包括镊子和剪刀）在121 °C下高压灭菌20分钟。
2. 将小鼠随机分配至实验组和对照组。将小鼠固定于手术板上。对小鼠进行处理 大肠杆菌 脂多糖（LPS，15 mg/kg）通过腹腔注射。根据每只小鼠的个体体重，将相应剂量的LPS稀释至0.1 mL磷酸盐缓冲液（PBS）中，使用1 mL注射器配合27 G针头注射LPS溶液；对照组动物注射等体积的PBS。
3. 将小鼠饲养在动物生物安全二级（BSL2）设施中，该设施提供清洁的笼具并维持适宜的室温。
4. 24 h后，用CO处死小鼠₂ 吸入
5. 选择小鼠颈部中央的手术区域。做一个约5 mm的小切口，用钝头镊子轻轻分离肌肉以暴露气管，直至气管显露。
6. 用10 mL无菌注射器（27 G针头）采集小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）。首先，轻柔地将针头插入气管，缓慢注入1 mL无菌PBS至气管内，随后用另一支带27 G针头的3 mL一次性注射器回抽支气管肺泡灌洗液。操作完成后，将注射器和针头弃置于生物危害锐器盒中。
7. 使用二氧化氯处理手术器械，然后在121 °C下高压灭菌20分钟以对所有手术器械进行灭菌。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
脂多糖	Sigma-Aldrich	Escherichia coli 055:B5
PBS pH7.2(1X)	Life technologies	20012-027