采用聚焦接触暴露法评估纳米结构表面的抗菌活性

摘要

来源： Holt-Torres, P. S. 等 纳米颗粒与纳米结构表面抗菌活性的评估 体外. 视频实验杂志 (2023)

本视频演示了使用聚焦接触暴露法评估纳米结构表面抗菌活性的方法。该方法概述了建立细菌与纳米结构表面直接接触、孵育、细菌收集以及菌落计数以评估细菌活性的各个步骤。

方案

1. 聚焦接触暴露法（方法D）
注意：在方法D中，将含有细菌的硝酸纤维素滤膜直接接触纳米结构表面的特定区域。该方法可最大程度减少体相样品在细菌培养过程中降解对细菌活性的干扰。

1. 制备细菌接种培养物，并确认实际接种密度。
2. 将样品裁剪为 1 × 1 cm² 的正方形。每种样品类型均设三个重复。如有需要，将样品置于直径 15 mm、高 10 mm 的三维（3D）支架上。将样品及其支架放入未经组织培养处理的聚苯乙烯孔板中的一个孔内。
3. 将硝酸纤维素膜剪裁至直径 1 cm，进行灭菌处理。将制备好的硝酸纤维素膜放置于含有适当培养基的琼脂平板上。
4. 用移液器将 50 µL 稀释后的细菌培养液滴加到滤膜上。
5. 用移液器将 50 µL 适当的培养基滴加到每个样品表面的中心位置。
6. 使用灭菌镊子从琼脂平板表面取出硝酸纤维素膜。小心翻转硝酸纤维素膜，并将其放置于样品表面，使细菌与 50 µL 培养基以及目标纳米结构表面接触。
7. 向每个含有样品的孔中加入 1 mL Tris 缓冲液以维持湿度。将含有所有样品的聚苯乙烯孔板在 37 °C 下孵育 24 小时。
8. 从每个样品表面回收硝酸纤维素膜，分别放入 5 mL Tris 缓冲液中。将收集的滤膜和纳米结构材料样品涡旋振荡 5 秒。
9. 对每个样品进行 10 分钟超声处理，在 5 分钟和 10 分钟时分别再次涡旋振荡 5 秒。
10. 收集所有样品的 Tris 缓冲液悬液，并将每份液体转移至独立的新的收集管中。
11. 对样品进行系列稀释并涂布平板。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Tris(羟甲基)氨基甲烷缓冲液 pH 8.5；Tris缓冲液	Sigma-Aldrich	42457
Falcon 15 mL 圆锥形离心管	Fisher Scientific	14-959-49B
LB液体培养基（Luria Bertani Broth）	Sigma Life Science	L3022
LB琼脂培养基（Luria Bertani Broth + 琼脂）	Sigma Life Science	L2897
MacroTube 5.0	Benchmark Scientific	C1005-T5-ST
硝酸纤维素膜	Fisherbrand	09-801A
100 mm 培养皿	VWR	470210-568
15 mm 培养皿	Fisherbrand	FB0875713A
超声波破碎仪	VWR	97043-936
VWR Benchmark Incu-shaker 10L	VWR	N/A