利用哺乳动物细胞培养生产与收集假病毒颗粒

摘要

来源： Jamieson, T. R., et al. 利用高通量荧光成像检测SARS-CoV-2中和抗体的伪病毒感染。 J. Vis. Exp. (2021)

本视频演示了用编码绿色荧光蛋白（GFP）的假病毒感染哺乳动物细胞、通过荧光显微镜监测病毒复制与扩散，以及收集含病毒的上清液用于后续实验的操作流程。

方案

1. VSV-S-EGFP 假病毒制备
   1. 感染
      1. 在 37 °C、5% CO₂ 条件下，用 VSV-S-eGFP（水疱性口炎病毒-刺突蛋白-增强型绿色荧光蛋白）储备病毒以感染复数（MOI）0.01 感染细胞，加入 12 mL 无血清 DMEM（Dulbecco 改良 Eagle 培养基），孵育 1 小时，期间偶尔轻摇培养板。弃去接种液，更换为新鲜 DMEM（含 2% FBS 或胎牛血清以及 20 mM HEPES，即 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸，pH 7.7），并将培养物转移至 34 °C、5% CO₂ 的培养箱中。
         注意： VSV-S-eGFP 在细胞培养中扩增需在 34 °C 条件下进行。
      2. 感染后约 48 小时，当观察到明显的细胞病变效应（CPE）和细胞脱落时，收集细胞上清液。自感染后 24 小时起，可使用荧光显微镜观察感染细胞中 eGFP 的广泛表达。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
杜尔贝科改良伊格尔培养基（Dulbecco's modified Eagle's medium，Gibco）	费舍尔科技（Fisher scientific）	10-013-CV
杜尔贝科磷酸盐缓冲液（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline，DPBS）	费舍尔科技（Fisher scientific）	21-031-CV
4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸（4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid，HEPES）	费舍尔科技（Fisher scientific）	BP-310-500
Vero E6 细胞	美国典型培养物保藏中心（ATCC）	CRL-1586