在巨大单层囊泡膜上可视化病毒结构蛋白的组装

摘要

来源：Olety, B., et. al., 可视化HIV-1 Gag与巨大单层囊泡（GUV）膜的结合。 J. Vis. Exp. (2016)

本研究展示了一种基于荧光的检测方法，用于观察人类免疫缺陷病毒1型结构蛋白的膜结合行为。该方法利用合成的巨大单层囊泡作为模型膜，可视化蛋白质的招募与组装过程，模拟病毒颗粒形成的早期步骤。

方案

1. 巨大单层囊泡（GUV）结合实验
   1. 使用剪切过的移液枪头，将含有体外翻译蛋白的5 µl体外翻译反应液与5 µl GUV混合于离心管中，室温孵育2–3分钟。
   2. 将带有小孔（直径3–4 mm）的聚二甲基硅氧烷（PDMS）片贴附于洁净的盖玻片上，并通过轻轻而牢固地按压确保其与盖玻片之间形成紧密密封。
   3. 将步骤1.1中得到的10 µl混合液加入该小孔中。
   4. 在室温下，使用倒置荧光显微镜或共聚焦荧光显微镜观察该混合液。
      注意：为防止蒸发，可在成像腔室上覆盖一片盖玻片。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
聚二甲基硅氧烷（PDMS）	Sylgard 弹性体基础试剂盒，Dow-Corning	Sylgard 184