小鼠鼻腔感染致病性流感病毒

摘要

来源：Wang, M., 等，小鼠流感病毒A感染期间滤泡辅助性T细胞与生发中心反应的评估。 J. Vis. Exp. (2020)。

本视频演示了通过鼻内感染的方式使小鼠感染致病性流感病毒，以建立呼吸道感染模型。该操作步骤概述了将病毒接种至鼻腔的过程。病毒进入宿主细胞后进行复制，并激活免疫系统。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

注意： 小鼠病毒感染及器官分离操作应在动物生物安全二级（ABSL2）条件下进行。

1. PR8流感病毒接种及小鼠体重记录

1. 在ABSL2实验室中准备8周龄的雄性C57BL/6小鼠用于感染实验。
   注意：本方案同样适用于雌性小鼠的实验。
2. PR8病毒稀释：从-80 °C冰箱中取出病毒，置于冰上直至完全融化。充分涡旋混匀原液病毒，然后在预冷的1.5 mL离心管中用无菌磷酸盐缓冲液（PBS）稀释至2斑块形成单位（PFU）/µL，PBS组分为：135 mM氯化钠（NaCl）、2.7 mM氯化钾（KCl）、10 mM磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）、1.8 mM磷酸二氢钾（KH₂PO₄）。
3. 小鼠麻醉：称量每只小鼠的体重，计算所需戊巴比妥钠（2 mg/mL）的注射体积（注射体积为小鼠体重（g）的4倍，单位为µL）。按计算体积进行腹腔注射。
   注意：此步骤旨在使小鼠呼吸平稳安静，以便准确经鼻接种病毒。心跳过快或过慢均提示麻醉不当。此外，建议使用兽用眼膏以防止角膜干燥。
4. 经鼻接种：将稀释后的PR8病毒充分涡旋混匀。吸取10 µL，逐滴小心地对一侧鼻腔进行经鼻接种。完成同笼内所有小鼠（最多5只）该侧接种后，再对另一侧鼻腔重复相同操作（整个接种过程中保持小鼠呼吸平稳安静）。每只小鼠总共感染40 PFU的PR8病毒。
5. 将小鼠置于温暖的笼中，保持胸腹卧位，以利于恢复。
6. 连续10天每日监测小鼠体重（感染当天记为第0天）。