登革病毒抗体在人原代巨噬细胞中对寨卡病毒的抗体依赖性增强作用

摘要

来源：Asad, S., 等. 在原代人细胞中对寨卡病毒的抗体依赖性增强作用进行定量分析. J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了登革病毒抗体-病毒复合物介导的寨卡病毒感染人原代巨噬细胞的抗体依赖性增强作用，通过模拟交叉反应性抗体如何促进Fcγ受体介导的病毒进入与复制，以研究感染机制及免疫相互作用。

方案

注意：本方案可用于检测任何表达 Fcγ 受体的人源细胞中寨卡病毒（ZIKV）复制的抗体依赖性增强（ADE）效应。该方案分为三个部分（图1）。

1. 细胞接种与感染设置：
注意：本研究使用人原代巨噬细胞或U937髓单核细胞系（ATCC-CRL-1593.2）。细胞在含10%胎牛血清（FBS）的RPMI（Roswell Park Memorial Institute）培养基中培养，置于37 °C、5%二氧化碳（CO₂）的培养箱内。所有操作均在生物安全二级（BSL-2）生物安全柜中的无菌条件下进行。

1. 接种 3 × 10⁴ 每孔加入100 µL培养基，在无菌平底96孔板中接种细胞，并置于37 °C、5% CO₂的培养箱中培养₂.
2. 接种细胞后，将血清样本在室温下解冻，并进行10倍系列稀释（即，1/10，1/100，1/1,000，1/10,000）的稀释液，将样品与无血清培养基混合。将稀释后的样品分装至无菌96孔板中。使用不含血清的病毒作为额外对照。
3. 将ZIKV毒株在37 °C水浴中解冻1-2分钟，随后迅速转移至冰上以备后续使用。
4. 向血清等分试样中加入相当于0.1感染复数（MOI）的ZIKV MR766株病毒量。
   注意： 确保稀释倍数保持恒定，总体积约为 200 µL；此体积足以满足每种处理条件的三个重复样本。保留三个未感染的孔作为下游分析的阴性对照。
5. 将添加病毒的血清稀释液置于含5% CO₂的37 °C培养箱中孵育₂ 孵育1小时，以使登革病毒（DENV）抗体与寨卡病毒颗粒形成复合物（为方便起见，下文简称 "免疫复合物").
6. 吸弃平底96孔板中已接种细胞的培养基，用无菌1×磷酸盐缓冲液（1× PBS）洗涤细胞。
7. 将50 µL免疫复合物加入每个孔中，在37 °C、5% CO₂条件下孵育₂ 孵育2小时。
8. 孵育2小时后，使用多通道移液器吸出含有免疫复合物的培养基，并用1×PBS洗涤细胞2次，以彻底去除免疫复合物及未结合的病毒颗粒。
9. 向每个孔中加入100 µL含10% FBS的新鲜完全培养基，并在37 °C、5% CO₂条件下培养细胞₂ 48小时。

结果

图1：ADE方案的示意图。 分步示意图展示了整个方案所涉及的所有步骤。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
胎牛血清	GEMINI	100-106
RPMI培养基	Gibco	11875093