重组浓集病毒介导的蚊虫幼虫基因沉默

摘要

来源： Liu, P., 等利用重组蚊媒细小病毒作为基因递送载体对蚊虫幼虫基因进行功能分析 J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了利用编码 microRNA 的重组蚊媒浓核病毒在蚊子幼虫中沉默特定基因的方法。被感染的早期幼虫可产生具有功能的 microRNA，从而抑制目标基因的表达，以用于后续研究。

方案

1. 蚊子转导

1. 洗涤100条1龄 白纹伊蚊 幼虫用去离子水清洗三次，然后将幼虫转移至含有95 mL去离子水的烧杯中。加入5 mL重组 埃及伊蚊 浓核病毒（rAaeDV）储备液（终浓度为 1.00 × 10¹⁰ copies/mL)
2. 在28 °C下孵育24 h 28 °C用去离子水清洗幼虫三次，然后将幼虫转移回培养皿中并正常饲喂。
3. 使用qPCR或Western blot检测幼虫中目标基因的表达水平。
   注意： 荧光信号检测法可用于更精确地分离感染的幼虫。例如，为检测表达DsRed的重组病毒感染幼虫所产生的荧光信号，可将幼虫置于凹面载玻片上，在感染后每8小时使用倒置荧光显微镜观察一次，持续至第2天。一旦检测到荧光幼虫，应将其分离至单独的塑料试验杯中，以便后续连续观察。利用该方法可鉴定出多种组织被感染的幼虫。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
离心机	Thermo Scientific	75004260
离心系统	Beckman Coulter	363118
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)	北京天根生物技术	FP205