使用外源脂多糖灭活噬菌体以获得无噬菌体的Salmonella培养物

摘要

来源：Fernández-Fernández, R., et. al. 从感染性沙门氏菌培养物中去除噬菌体。J. Vis. Exp. (2024)

本视频展示了利用外源性LPS（脂多糖）作为受体模拟物使裂解性噬菌体失活的方法 沙门氏菌 培养物。通过依次进行孵育、离心和洗涤，可去除噬菌体，从而获得可用于后续实验的具有活性且无噬菌体的细菌悬液。

方案

1. 从感染的Salmonella enterica培养物中去除噬菌体
   1. 将20 µL细菌悬液与市售的Salmonella enterica脂多糖（LPS）在1 mL经0.22 µm滤膜过滤的LB培养基（Lennox broth）中混合，使LPS终浓度为3.75 mg/mL，在37 °C、200 rpm振荡条件下孵育2小时。
      
      注意：从细胞释放到培养基中的噬菌体可能结合市售的S. enterica LPS，而非细菌自身的LPS。
   2. 孵育2小时后，将1 mL培养物转移至微量离心管中，在10,354 × g条件下离心2分钟。滴定点4：取上清液作为第四份样品用于滴定。
   3. 用1 mL过滤后的LB培养基洗涤沉淀3次。
   4. 洗涤后，将沉淀重悬于1 mL 2x LB培养基中。取20 µL该混合液加入1 mL经0.22 µm滤膜过滤的LB培养基，并添加0.8 mg/mL市售LPS，在37 °C、200 rpm振荡条件下孵育2小时。滴定点5：将剩余的细菌悬液作为第五份样品用于滴定。
   5. 孵育2小时后，将1 mL培养物转移至微量离心管中，在10,354 × g条件下离心2分钟以收集沉淀。滴定点6：将上清液倒入新离心管中，作为第六份样品用于滴定。
   6. 用过滤后的LB培养基洗涤细菌细胞3次。洗涤后，将收集的细胞重悬于1 mL经0.22 µm滤膜过滤的LB培养基中。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
离心机	Eppendorf		无特殊要求
烧瓶			无特殊要求
镊子			无特殊要求
玻璃试管			无特殊要求
来自鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica）血清型的脂多糖	Sigma-Aldrich	L6511-25 mg	溶于无菌水