利用腺相关病毒载体转导人源化大鼠肝脏

本文内容

摘要

本视频展示了在人源化大鼠肝脏支架中通过腺相关病毒介导的基因递送。该载体通过受体介导的内吞作用，将编码荧光报告蛋白和基因沉默RNA的转基因递送至肝细胞。该模型支持在灌注的三维肝组织系统中实现高效的转导。

方案

肝脏模型的转导

通过加入相应体积的磷酸盐缓冲液（PBS），将腺相关病毒（AAV）载体溶液调整至最终浓度为5 ml中含有2.7 × 10¹³个病毒基因组。
通过移除套管上的管路，将肝脏与培养基循环系统断开。将一个5 ml注射器连接至门静脉套管，并注入全部AAV载体溶液（5 ml）。
注意：可选步骤：加入酚红（5 µg/ml）以追踪AAV载体溶液在肝脏内的分布情况。
在无灌注条件下孵育1小时。逐步增加流速：先以1.25 ml/min流速运行10分钟，再以2.5 ml/min流速运行20分钟，最后以3.75 ml/min流速运行30分钟。将再细胞化的鼠肝持续培养6天。
注意：每隔一天更换三分之一的培养基（50 ml）。取样培养基以测定生理参数，如乳酸脱氢酶活性、培养基样品的pH值以及葡萄糖和乳酸的浓度。

材料

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