使用电子显微镜观察和评估法斯托病毒的形态与大小

摘要

来源：Bou Khalil, J. Y., et al．利用 Vermamoeba vermiformis 从环境样本中快速分离新型 Faustovirus 的策略．J. Vis. Exp. (2016)．

本视频展示了利用透射电子显微镜对感染阿米巴培养物中的法斯托病毒颗粒进行成像的过程。内容包括载网制备、使用钼酸铵进行负染色以增强对比度，以及在显微镜下观察病毒颗粒。该实验方案最后通过显微镜内置的软件工具测量法斯托病毒的大小。

方案

1. 电子显微镜
   1. 在载玻片上初步鉴定后，通过电子显微镜观察上清液培养物，评估巨型病毒的存在。
   2. 将5 µl阳性样本滴加到经辉光放电处理的载网上，在室温下静置约20分钟。
   3. 小心干燥载网，并在其表面滴加一滴1%钼酸铵染色液，染色10秒，随后让载网干燥5分钟。
   4. 在200 keV条件下进行电子显微镜观察。
   5. 将载网放置于样品托上，将样品托插入显微镜中。点击相应图标查看真空概览，关闭阀门，以束斑大小5、放大倍数×25,000开始观察。
   6. 使用ImageJ或直接在显微镜上通过采集界面中的测量工具对巨型病毒进行测量。
      注意：根据约200 nm的衣壳尺寸，将样本归类于Faustovirus属。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
阿米巴菌株 CDC-19	ATCC	法国	50237
培养皿	Cellstar	法国	655180
真空驱动滤器	Thermo scientific	法国	BPV4550 / 20170115
磷酸盐缓冲液	Thermo Fisher scientific	法国	10010-023
DAPI 染色剂	Life Technologies	法国	D1306
碳支持膜铜网	Euromedex	法国	FCF400NI
钼酸铵	VWR internationanl	法国	21276185
培养瓶	SARSTEDT	德国	833911
0.22 μm 滤器	Milex millipor	法国	SE2M229104
超速离心机 Sorval WX 80	Thermo scientific	法国	9102448
快速流动滤器	Nalgene	法国	450-0020