小鼠经鼻感染鼠疱疹病毒以评估宿主免疫应答

摘要

来源：Zhang, J., et al. P. 解析病毒逃逸细胞因子产生过程中的先天免疫信号传导。 J. Vis. Exp. (2014)

本视频展示了通过鼻内递送小鼠疱疹病毒以在小鼠体内诱导肺部特异性免疫反应的方法。随后处理肺组织以获得含有细胞因子的上清液，用于后续宿主免疫反应的评估。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 利用ELISA检测γHV68感染小鼠中的细胞因子分泌

1. 通过腹腔注射1.5 mg氯胺酮/0.12 mg赛拉嗪，对性别匹配的6-8周龄C57BL/6 (B6) 同窝小鼠（每组8-12只）进行麻醉，并在40 µl体积中经鼻接种40 PFU（空斑形成单位）的γHV68。在感染后的不同时间点，采用CO₂吸入法处死小鼠，随后进行颈椎脱位。
2. 沿胸骨作左侧侧向切口打开胸腔，并用锐利剪刀剪开肋骨。收集肺组织。
3. 取一半肺组织（左肺叶）放入含有500 µl 1.0 mm氧化锆/二氧化硅珠的无菌1.5 ml螺口管中。向管中加入1 ml冷的无血清DMEM（Dulbecco改良Eagle培养基），通过珠击法均质化肺组织30秒。将管置于冰上冷却2分钟，重复此过程一次。
4. 在4 °C下以15,000 × g离心10分钟，收集上清液，并按以下所述方法测定细胞因子的产生。
5. 使用市售的细胞因子ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒，按照制造商说明书测定细胞因子水平。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
小鼠 CCL5 ELISA 试剂盒	R&D Systems	DY478
1.0 mm 氧化锆/二氧化硅珠	BioSpec Products	11079110z