工程化病毒样颗粒的制备 大肠杆菌

摘要

来源：Chen, Z., 等. 利用二溴马来酰亚胺-二硫键化学法制备偶联诱导的荧光聚乙二醇化病毒样颗粒。J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了噬菌体Q的可控表达方法β 经改造的衣壳蛋白 大肠杆菌 所得蛋白质可自组装成病毒样颗粒，并用于后续生物偶联。

方案

Qβ的表达

1. 用1:1的漂白剂/乙醇擦拭工作台面。
2. 在无菌环境中，通过将单个大肠杆菌BL21(DE3)菌落接种至3 mL的超级优化肉汤（SOB）培养基中，制备两份3 mL的种子培养物。 大肠杆菌 BL21(DE3) 菌落接种至3 mL超级优化肉汤（SOB）培养基中，在无菌环境下操作。
3. 在 250 rpm 条件下于摇床中培养，温度为 37 °C，相对湿度为 0% 37 °C 并在37 °C、0%相对湿度（rH）环境中过夜培养。
4. 在SOB培养基中接种预培养菌液：
   1. 将两个3 mL的种子培养物从摇床中取出，在无菌环境下，将每种种子培养物分别倒入两个装有1 L新鲜SOB培养基的2 L带挡板的锥形瓶中。
   2. 将接种后的培养基置于摇床中，在37 °C、0%相对湿度（rH）的环境中以250 rpm振荡培养。 37 °C 和0%相对湿度（rH）的环境。
5. 在37 °C、0%相对湿度（rH）环境中，于摇床中以250 rpm培养细菌，直至OD600达到0.9–1.0。 37 °C 和0%相对湿度（rH）的环境中，直至OD₆₀₀ 达到 0.9–1.0。
6. 加入1 mL 1 M异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG） β使用 P1000 移液器加入 1 mL 1 M 异丙基-β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG）以诱导蛋白表达。
7. 将培养基置于摇床中，在 250 rpm、37 °C 和 0% 相对湿度（rH）的条件下继续培养 37 °C 并在37 °C、0%相对湿度（rH）环境中过夜培养。
8. 次日早晨从摇床中取出培养物，使用1000 mL离心瓶在20,621 × g条件下于4 °C离心1小时以收集细胞。 × × g 离心 1 小时 4 °C 收集细胞。
9. 弃去上清液，收集细胞沉淀。
   1. 将上清液倒入含有约 5 mL 漂白剂的烧瓶中以灭活细菌。此为废弃物。
   2. 用刮刀将离心瓶底部的菌体沉淀刮下，并转移至50 mL离心管中。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
LB肉汤（Miller）	EMD Millipore	1.10285.0500
胰蛋白胨，粉末	Research Products International	T60060-1000.0
酵母提取物，粉末	Research Products International	Y20020-1000.0
无水硫酸镁	P212121	CI-06808-1KG
氯化钠（结晶/符合ACS认证）	Fisher Scientific	S271-10
氯化钾	Fisher Scientific	BP366-500
Elga PURELAB Flex 3 水净化系统	Fisher Scientific	4474524
磷酸二氢钾	Fisher Scientific	BP362-1
无水磷酸氢二钾	Fisher Scientific	P288-500
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）	Sigma Aldrich	I6758-1G
Nalgene 带盖离心瓶，聚丙烯共聚物	Thermo Scientific	3141-0250
VWR Os-500 轨道摇床	VWR Scientifc Products	14005-830
P1000 移液器	Gilson	F123602
Falcon 50 mL 圆锥形离心管	Fisher Scientific	14-432-22