通过透射电子显微镜观察戊型肝炎病毒纳米颗粒

摘要

来源： Chen, C. C., 等. 利用化学偶联方法对戊型肝炎病毒纳米颗粒进行表面功能化. J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了戊型肝炎病毒样纳米颗粒的制备及其用于透射电子显微镜观察的负染色方法。该方法通过高分辨率成像突出显示了自组装的仅含衣壳蛋白颗粒的结构完整性，证实其形态均一且纯度较高。

方案

1. 使用透射电子显微镜（TEM）观察戊型肝炎病毒纳米颗粒（HEVNPs）
   1. 用10 mM 2-(N-吗啉代)乙磺酸（MES）pH 6.2将HEVNP样品配制或稀释至0.5 - 2 mg/mL，用于TEM成像。
   2. 使用40 mA电离电流对碳膜载网进行30秒辉光放电处理，以产生亲水性碳表面。辉光放电设备见材料表。
      注意：载网的亲水性碳表面在辉光放电处理后仅可维持30分钟。
   3. 用镊子夹持载网，加入2 µL HEVNP样品，静置15 - 30秒，用滤纸吸去多余液体。
   4. 立即用ddH₂0洗涤载网，并用滤纸吸干。
   5. 立即向载网上加入2 µL 2%醋酸铀酰染液，静置15秒，然后用滤纸吸干。将样品载网置于电子除湿干燥柜中过夜干燥。
   6. 将载网转移至透射电子显微镜中，在10,000至80,000倍放大倍数下进行成像。由于缺乏病毒RNA，HEVNPs在TEM下呈现为空心的二十面体蛋白结构，直径约为27 nm。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
MES 水合物	Sigma-Aldrich Chemical Co	M8250-250G	MES
EMS 电晕放电器	Electron Microscopy Science		电晕放电器