一种小鼠膀胱癌的原位模型

摘要

通过导管插入、局部烧灼以及随后将癌细胞黏附至灼伤部位，可在雌性小鼠体内以微创方式建立膀胱肿瘤模型。

摘要

在此简便的操作过程中，通过导管插入、局部烧灼以及后续的细胞黏附，在雌性C57小鼠体内建立膀胱肿瘤模型。首先对小鼠进行经尿道导管插入并排空膀胱，随后再次插入导管，以便将铂金丝置入膀胱内，同时避免损伤尿道或膀胱。导管由聚四氟乙烯（Teflon）制成，可作为导线的绝缘层，使电流通过导线导入膀胱，造成局部烧伤。使用电灼装置向导线暴露端输送2.5 W功率，烧除膀胱壁的细胞外层，从而为后续经导管注入悬浮状态的癌细胞提供附着位点。细胞在膀胱内保留90分钟后，移除导管，使膀胱自然排空。通过超声成像监测肿瘤的形成过程。配套视频中特别详细展示了导管插入技术的操作要点。

方案

1. 动物

1. 雌性 C57BL/6J 小鼠（Mus musculus）在发货前经供应商检测确认无传染性外寄生虫、蠕虫内寄生虫以及17种小鼠病毒的抗体。小鼠饲养于杜兰大学经AAALAC认证的动物实验设施中，遵循 实验动物护理和使用指南.¹
2. 小鼠以每笼4-5只的密度群养于带有硬木垫料的独立通气聚碳酸酯笼具中，笼顶配有微隔离滤膜。自由提供颗粒状啮齿类动物饲料和自来水。
3. 小鼠在研究开始前需适应环境7天。

2. 细胞

1. 使用小鼠移行细胞癌细胞系 MB49 制备膀胱肿瘤。
2. 细胞在添加了 10% 胎牛血清、100 单位/毫升青霉素和 100 单位/毫升链霉素的杜尔贝科改良伊格尔培养基中培养。
3. 培养物在 37°C 和 5% CO₂ 条件下维持，每两到三天更换一次培养基。

3. 动物原位肿瘤模型

本文所述的膀胱肿瘤模型灌注方法是对 Gunther 等人²所描述步骤的改进。

1. 使用2%异氟烷（MWI/VetOne，Meridian，ID，货号# 501017）与氧气混合诱导麻醉，并以0.75-....

讨论

这种在雌性小鼠中建立原位膀胱肿瘤的微创方法也可用于MB49以外的其他细胞类型，但应预期结果可能有所不同。当使用侵袭性较低的肿瘤细胞时，可略微增加功率（以0.5 W为增量确定新的最佳功率），从而产生更利于肿瘤细胞附着的区域；同时延长灌注细胞在膀胱内的孵育时间，将增加细胞在灼伤部位的附着量（未发表数据）。尽管某些方案建议使用10 W的电灼功率²，但该功率应视为上限，甚至应完全避免使用。当使用其他细胞类型时，增加接种细胞的浓度也可提高成功率。

....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
C57Bl/6J 小鼠	杰克逊实验室	000664	3-5 周龄
聚碳酸酯笼具及通风笼架	Lab Products	Super Mouse 750	327 mm x 190 mm x 143 mm
硬木垫料	Harlan 实验室	实验室–级 SaniChips
啮齿类动物饲料	Harlan 实验室	啮齿类动物饲料 2019
静脉导管	MWI 兽医用品公司	009231	24 G x ¾ 英寸
电灼仪	Bovie 医疗公司	Aaron 900
超声设备	Sonosite	180 Plus (兽用)
MB49 细胞系	维克森林大学浸信会医学中心	N.A.
DMEM	Invitrogen	21063-029
胎牛血清	Gemini Bio 产品公司	100106 500A57B
青霉素-链霉素	Invitrogen	15140-163