建立可逆性胆汁淤积大鼠模型

摘要

胆汁淤积是一种外科医生和胃肠病学家经常遇到的临床状况。鉴于大鼠体型较小且肝胰胆解剖结构独特，建立可逆性胆汁淤积大鼠模型具有较大挑战性。本视频文章演示了可逆性胆汁淤积模型的建立方法。

摘要

胆汁淤积是外科医生和胃肠病学家经常遇到的一种临床病症。胆汁淤积可引起多种生理变化，并影响营养状况和手术预后。研究肝脏及其他器官发生的病理生理变化具有重要意义。已有大量研究在胆汁淤积大鼠模型中开展。

在最近一项关于甲基泼尼松龙在缺血再灌注损伤中作用的研究中，我们采用了一种可逆性胆汁淤积大鼠模型。已有多种建立可逆性胆汁淤积模型的技术被报道。由于大鼠体型较小且肝胰胆系统解剖结构特殊，建立可逆性胆汁淤积大鼠模型具有较大挑战性。本视频文章演示了可逆性胆汁淤积模型的建立过程。

该模型可用于多种研究，例如观察胃肠道在营养、生理、病理、组织学和免疫学方面的变化。该模型还可用于评估胆汁淤积及各种治疗干预对主要肝脏手术的影响。

方案

1. 大鼠胆道解剖

胆管的平均直径和长度分别为1 mm和29 mm。幽门与十二指肠乳头之间的平均距离为28 mm。有两条主要的胰管汇入胆管——前胰管开口于左侧，后胰管开口于右侧。除这些主胰管外，还有若干条副胰管，分别引流胰腺的三个部分，并直接开口于胆管。⁶

2. 技术

所有动物实验均遵循美国国立卫生研究院关于伦理研究的指南，并经机构的研究委员会和动物护理委员会批准。本演示使用8周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠。大鼠购自马萨诸塞州威尔明顿的查尔斯河实验室，体重均超过300克。大鼠可自由摄取标准实验室饲料，并在标准实验室条件下共同饲养。

大鼠首先用异氟烷进行麻醉，并在手术过程中通过面罩持续给予异氟烷以维持麻醉状态。从剑突开始做一条2 cm长的正中切口。切开筋膜后，使用Sen拉钩将肝叶向上方牵开，用棉签将十二指肠向尾侧牵开。胆管被识别为进入十二指肠的管状结构。将胆管轻度拉紧后部分切开。使用一根无菌的聚乙烯管，长5 cm，内径0.6 mm，外径0.9 mm。将该管的一端热封封闭，另一端轻轻斜面削尖。将斜面端插入胆管中，并在胆管切口的近端和远端均使用8-0尼龙缝线固定。剩余的导管连同封闭端一起置于腹腔内。手术区域用生理盐水冲洗。随后以两层方式关闭腹腔，使用4-0聚乙醇酸缝线。腹白线采用连续缝合，皮肤采用间断皮内缝合。皮肤表面再涂抹皮肤粘合剂。术后大鼠置于标准实验室条件下恢复，并每日监测体重，以确保充分的水化状态。

对于胆汁淤积逆转手术，按照先前所述方法使用异氟烷对大鼠进行麻醉。通过先前的切口位置打开腹腔。找到导管并将其从腹膜腔中取出。使用钝性与锐性分离技术松解导管周围的网膜粘连。随后在十二指肠上确定一个适合十二指肠造口管舒适放置的位置。使用8-0尼龙线缝合一个直径为2-3 mm的荷包缝合线。在该荷包缝合线内切开十二指肠。将导管的封闭端剪至适当长度，确保胆汁自由流通。将此端导管置入十二指肠内，并收紧荷包缝合线。用生理盐水冲洗腹腔后逐层关闭腹腔。

在之前的一项研究中，采用不同技术实施胆肠吻合术，大鼠存活了12周，且在此期间健康状况良好。此外，该研究证实，对胆管结扎2周的大鼠施行胆肠吻合术后，其生化和组织学改变得以逆转。⁷

讨论

胆汁淤积会导致胃肠道系统发生多种变化。已有研究探讨了胆汁淤积对免疫系统和营养状态的影响。^1-3 胆汁淤积可能影响肝脏手术的预后。已有研究致力于改善存在胆汁淤积情况下肝脏手术的结局。^4-5 随着医学和研究的进步，未来将开展更多关于胆汁淤积的研究。因此，建立一个良好的胆汁淤积模型十分必要。大鼠作为实验动物具有易获得、易操作、成本低以及适用于肝胰胆系统研究的稳定性等优势，因而被优先选用。⁶ 本视频文章将演示构建一种可逆性胆汁淤积模型的方法，该模型可用于未来相关研究。